延安大学：《医学微生物学与免疫学》精品课程实验指导教学_免疫学——E玫瑰花环形成实验 E Rosette Forming Cell Test

E玫瑰花环形成实验 E Rosette Forming Cell Test 中山医学院免疫教研室 2012-04

E玫瑰花环形成实验 中山医学院免疫教研室 2012-04 E Rosette Forming Cell Test

实验目的 ◆掌握E花环形成的原理 ◆熟悉E花环形成实验的步骤及光镜下E 花环的形态 ◆熟悉磁珠分离的原理

◆ 掌握E花环形成的原理 ◆ 熟悉E花环形成实验的步骤及光镜下E 花环的形态 ◆ 熟悉磁珠分离的原理 实验目的

T细胞表面分子 T细胞的表面分子是T细胞与其 它细胞和分子间相互识别及作 密度梯度离心法 用的物质基础。它们在T细胞活 化、增殖和分化等过程中起重 CD4要作用 CD4+ TGR CD3 TCR-CD3复合物参与T细胞 T cels 的抗原识别和信号转导; CD2、cD28、cTLA-4. T细胞 cD45、CD40L等膜蛋白参与T 细胞活化及T细胞与其它细胞间 相互作用。 CD2 CD8+ CD8 cD4CD8分子辅助TCR识别 ce 结合抗原,参与信号转导;根 据CD4和CD8分子的表达将其 分为CD4+T和CD8+T细胞

T细胞的表面分子是T细胞与其 它细胞和分子间相互识别及作 用的物质基础。它们在T细胞活 化、增殖和分化等过程中起重 要作用。 TCR-CD3复合物参与T细胞 的抗原识别和信号转导； CD2、CD28、CTLA-4、 CD45、CD40L 等膜蛋白参与T 细胞活化及T细胞与其它细胞间 相互作用。 CD4/CD8分子辅助TCR识别 结合抗原，参与信号转导；根 据CD4和CD8分子的表达将其 分为CD4+T和CD8+T细胞。 T细胞 CD2 CD3 TCR CD8 密度梯度离心法 CD4 T细胞表面分子

依靠表面标记的分离方法 流式细胞术分离法:利用各种荧光素标记的 表面标记特异性抗体,使不同表面标记的 细胞结合上不同的荧光素,借助荧光活化 细胞分选仪将各种细胞分离开来

依靠表面标记的分离方法 流式细胞术分离法：利用各种荧光素标记的 表面标记特异性抗体，使不同表面标记的 细胞结合上不同的荧光素，借助荧光活化 细胞分选仪将各种细胞分离开来。 *

E花环分离法原理 成熟的人T细胞表面表达绵羊红细胞(SRBC) 受体(即CD2分子),能与SRBC结合形成玫 瑰花环样结构,可在光学显微镜下观察计数。 本法可用于分离外周血T细胞及检测I细胞的数 量和比例。 SrBC cD T B

成熟的人T细胞表面表达绵羊红细胞（SRBC） 受体（即CD2分子），能与SRBC结合形成玫 瑰花环样结构，可在光学显微镜下观察计数。 本法可用于分离外周血T细胞及检测T细胞的数 量和比例。 E花环分离法原理 * TT B SRBC CD2

实验材料 1肝素抗凝血 2.Hank3s液 3沐巴细胞分离液 4绵羊红细胞悬液 5灭活小牛血清 6水平离心机、37℃C温箱、显微镜等

实验材料 1.肝素抗凝血 2.Hank’s液 3.淋巴细胞分离液 4.绵羊红细胞悬液 5.灭活小牛血清 6.水平离心机、37℃温箱、显微镜等

实验方案 取外周血 分离 淋巴细胞」+绵羊红细胞 显微镜下观察

实验方案 取外周血 淋巴细胞 绵羊红细胞 分离 显微镜下观察 +

实验步骤 淋巴细胞的分离 用Hank液配成 106细胞/0.1ml

实验步骤 淋巴细胞的分离 用Hank’s液配成 106细胞/0.1ml

取0.1ml 加等量灭活小牛血清(0.1m 加入0.5%绵羊红细胞02m 混匀,37°温箱放置5分 钟 1000rpm离心5mn

加等量灭活小牛血清(0.1ml) 取0.1ml 加入0.5％绵羊红细胞0.2ml 混匀，37℃温箱放置5分 钟 1000rpm离心5min

置4°C冰箱 30-45min 加1小滴1%美蓝,用毛细吸管轻轻混匀 5min 取1滴于玻片上,加上盖玻片 高倍镜下观察玫瑰花环形成细胞

加1小滴1％美蓝，用毛细吸管轻轻混匀 取1滴于玻片上，加上盖玻片 高倍镜下观察玫瑰花环形成细胞 置4℃冰箱 5min 30-45min