延安大学：《医学微生物学与免疫学》精品课程实验教学_微生物学_07 病毒的形态学诊断和培养方法

病毒的形态学诊断和培养方法 示教 病毒的形态学诊断 病毒的电镜照片、狂犬病毒包涵体、麻疹病 毒包涵体 录像 病毒的培养法 ELSA试验

病毒的形态学诊断和培养方法 ◼ 示教 ◼ 病毒的形态学诊断 ◼ 病毒的电镜照片、狂犬病毒包涵体、麻疹病 毒包涵体 ◼ 录像 ◼ 病毒的培养法 ◼ ELISA试验

病毒的形态学诊断 细胞病变效应( cytopathic effect CPE): 病毒在细胞内增殖,可引起不同的结果,有的细 胞完全被破坏,有的只有轻微的病变,或无可见 的变化,由病毒引起的细胞病变,称CPE。 包涵体( inclusion bodies): 某些病毒感染的细胞内,光镜下可见在胞浆 或核内出现嗜酸性或嗜碱性染色,大小、数 量不等,圆形或不规则形的团块结构

病毒的形态学诊断 ◼ 细胞病变效应（cytopathic effect CPE）： 病毒在细胞内增殖，可引起不同的结果，有的细 胞完全被破坏，有的只有轻微的病变，或无可见 的变化，由病毒引起的细胞病变，称CPE。 ◼ 包涵体（inclusion bodies）： 某些病毒感染的细胞内，光镜下可见在胞浆 或核内出现嗜酸性或嗜碱性染色，大小、数 量不等，圆形或不规则形的团块结构

正常细胞 细胞病变效应 CPE

正常细胞 细胞病变效应 CPE

Negri body in a neuron

Negri body in a neuron

Giant multinucleated cells with nuclear and cytoplasmic red inclusions

Giant multinucleated cells with nuclear and cytoplasmic red inclusions

病毒的培养方法(录像) 病毒必须在活细胞内才能进行生命活动 ■培养方法 ■动物接种法 鸡胚培养法 组织培养法

病毒的培养方法（录像） ◼ 病毒必须在活细胞内才能进行生命活动 ◼ 培养方法 ◼ 动物接种法 ◼ 鸡胚培养法 ◼ 组织培养法

酶联免疫吸附试验 ELISA 原理: 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记 加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有 色产物,产物的量与标本中受检物质的量直 接相关,由此进行定性或定量分析

酶联免疫吸附试验——ELISA ◼ 原理： 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有 色产物，产物的量与标本中受检物质的量直 接相关，由此进行定性或定量分析

Positive ample Negative sampl FiG 1. Solid phase membrane(e-g. a 96well plate)precoated PIG. 2 Serum samples are added and incubated to allow spe- with antigen ursing a coating buffer that enhances binding Sites cific antibodies to bind to specific antigen, Antibodies that do unoccupied by the antigen are blocked with a blocking buffer not recognize and bind specifically to the antigen remain um. to prevent nonspecific binding of sample. bound 反应板上包被的抗原 加入不同稀释度血清

反应板上包被的抗原 加入不同稀释度血清

八八▲▲ Posite sample Negative smple Postie sample crane sumr RIG. 3. Nonspecific antibodies that do not bind to the antigen are washed away FIG 4. An enzyme labeled (eg alkaline phosphatase or horse- radish peroxidase) secondary antibody is incubated with the ample and binds tightly to the sample antibod 洗涤清除非特异性抗体 加入酶标抗抗体

洗涤清除非特异性抗体 加入酶标抗抗体

▲ Positive sample Positie sample Negatie sample Negatie smple FIG. 6. The enzyme cleaves the substrate causing a color change FIG 5 Unbound labeled antibody is washed anway, and a colo of the substrate solution. The intensity of the color is quanti- dimetric sbstrate (e.g. d-nitrophenylphosphate of ATBS) is tated using a spectrophotometer and is proportional to the added mount of antibody present in the smpl 加入反应底物 显色

加入反应底物 显色