延安大学：《医学微生物学与免疫学》精品课程实验教学_微生物学_05 棒状杆菌与分枝杆菌

棒状杆菌与分枝杆菌 示教 结核分枝杆菌:抗酸染色法,液体、固体培养 麻风分枝杆菌:抗酸染色 白喉棒状杆菌: Alberti染色法、革兰染色法 吕氏血清斜面、亚碲酸盐平板 操作 病人痰液(结核分枝杆菌)抗酸染色法 白喉棒状杆菌 Albert染色法

棒状杆菌与分枝杆菌 • 示教 – 结核分枝杆菌：抗酸染色法，液体、固体培养 – 麻风分枝杆菌：抗酸染色 – 白喉棒状杆菌： Albert染色法、革兰染色法 吕氏血清斜面、亚碲酸盐平板 • 操作 – 病人痰液（结核分枝杆菌）抗酸染色法 – 白喉棒状杆菌 Albert染色法

结核分枝杆菌( M. tuberculosis 形态: 细长,略弯曲的杆菌,多聚集成团。无鞭毛,芽胞。 染色性: 不易着色,齐尼抗酸染色阳性。菌体呈红色,背景中其他物质 蓝色。 培养特性: 专性需氧,最适37℃,营养要求高,生长缓慢,18h分裂一代 罗氏( Lowenstein-Jensen)培养基含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐、孔 雀绿,2~6周可见菌落生长,菜花、颗粒或结节状菌落,乳白色 或黄色,不透明。在液体培养基,生长于表面,有皱褶

结核分枝杆菌(M.tuberculosis) 形态： 细长，略弯曲的杆菌，多聚集成团。无鞭毛,芽胞。 染色性： 不易着色，齐尼抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景中其他物质 蓝色。 培养特性： 专性需氧，最适37℃ ，营养要求高，生长缓慢，18h分裂一代。 罗氏(Lowenstein-Jensen)培养基含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐、孔 雀绿，2~6周可见菌落生长，菜花、颗粒或结节状菌落，乳白色 或黄色，不透明。在液体培养基，生长于表面，有皱褶

抗酸染色法 抗酸染色法(acid- fast stain):以5%石炭酸复 红染色,再用3%盐酸酒精脱色,然后用美 蓝复染,则分枝杆菌呈红色(+),其他细菌和 背景物质为蓝色(-)。 实验过程:取痰液→涂片(略厚)→干燥- 固定→石炭酸复红染色8~10分钟后→用3% 的盐酸酒精脱色约12分钟,脱色时轻摇玻 片,直到涂片颜色脱去为止→水洗后,用碱 性美蓝复染1分钟→水洗,印干→镜检

抗酸染色法(acid-fast stain) ：以5％石炭酸复 红染色，再用3％盐酸酒精脱色，然后用美 蓝复染，则分枝杆菌呈红色(+)，其他细菌和 背景物质为蓝色(-)。 实验过程：取痰液→ 涂片（略厚）→干燥→ 固定 → 石炭酸复红染色8~10分钟后→用3% 的盐酸酒精脱色约1~2分钟，脱色时轻摇玻 片，直到涂片颜色脱去为止→ 水洗后，用碱 性美蓝复染1分钟→水洗，印干 → 镜检 抗酸染色法

白喉棒状杆菌( C diphtheriae) 革兰染色:G+,菌体细长微弯,一端或两端膨大呈棒状,排列 成Ⅴ或L形(分裂时末端相连) Albert染色:见异染颗粒,菌体蓝绿色,异染颗粒蓝黑色(用于 鉴定) 、,Am染色法 制片同革兰染色, 甲液染5分钟→水洗→再 以乙液(碘液)染1分钟 水洗→印干→油镜检

Albert染色法 制片同革兰染色， 甲液染5分钟→水洗→再 以乙液（碘液）染1分钟 →水洗→印干→油镜检 白喉棒状杆菌(C.diphtheriae) 革兰染色：G +，菌体细长微弯，一端或两端膨大呈棒状，排列 成V或L形（分裂时末端相连）。 Albert染色：见异染颗粒，菌体蓝绿色，异染颗粒蓝黑色（用于 鉴定）

白喉棒状杆菌培养特性 吕氏血清斜面培养物:含凝固的血清,生长迅 速。细小、灰白色、湿润、圆形突起的菌落 亚碲酸钾血平板:黑色菌落 亚碲酸盐原碲(黑色)

白喉棒状杆菌培养特性 吕氏血清斜面培养物：含凝固的血清，生长迅 速。细小、灰白色、湿润、圆形突起的菌落。 亚碲酸钾血平板：黑色菌落。 亚碲酸盐 碲 (黑色) 还原

E|ek平板试验结果(白喉毒素鉴定) 白喉杆菌菌苔 沉淀线(阳性 含白喉抗毒素滤纸片 Elek Test

Elek平板试验结果(白喉毒素鉴定) Elek Test 沉淀线(阳性) 含白喉抗毒素滤纸片 白喉杆菌菌苔

麻风分枝杆菌 M. leprae) 形态染色 病人鼻粘膜分泌物标本经胞内抗酸染色,可 见麻风分枝杆菌存在于细胞中,细胞胞浆呈 泡沫状。菌体细长,略带弯曲,常呈束状排 列。治疗后,菌体可呈短杆菌、颗粒状等

麻风分枝杆菌(M. leprae) 病人鼻粘膜分泌物标本经胞内抗酸染色，可 见麻风分枝杆菌存在于细胞中，细胞胞浆呈 泡沫状。菌体细长，略带弯曲，常呈束状排 列。治疗后，菌体可呈短杆菌、颗粒状等。 形态染色