延安大学：《医学微生物学与免疫学》精品课程实验教学_微生物学_04 肠道杆菌

肠道杆菌 示教: 主要肠道杆菌(大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杄菌及变形杆菌) 的形态、染色性 主要肠道杄菌(大肠杆菌、痢疾杄菌、伤寒杄菌及变形杆菌) 的培养特性 主要肠道杄菌(大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杄菌及变形杆菌) 的生化反应 操作: 肥达反应 粪便肠道致病菌的分离和鉴定

肠道杆菌 • 示教： – 主要肠道杆菌（大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及变形杆菌） 的形态、染色性 – 主要肠道杆菌（大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及变形杆菌） 的培养特性 – 主要肠道杆菌（大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及变形杆菌） 的生化反应 • 操作： – 肥达反应 – 粪便肠道致病菌的分离和鉴定

肥达试验 (Widal Test) 原理:用已知伤寒沙门菌O、H抗原,以及甲型副 伤寒、肖氏沙门菌、希氏沙门菌H抗原的诊断菌 液与受检血清作定量凝集试验,测定受检血清中 有无相应抗体及其效价的试验。 用途:辅助诊断伤寒,副伤寒

肥达试验 (Widal Test) 原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原，以及甲型副 伤寒、肖氏沙门菌、希氏沙门菌H抗原的诊断菌 液与受检血清作定量凝集试验，测定受检血清中 有无相应抗体及其效价的试验。 用途：辅助诊断伤寒，副伤寒

微量板1 3 5 伤寒o|0.2ml 0.2ml Ag测Ab 已知未知 伤寒H0.2ml 0.2ml 滴度 副甲H02m 0.2ml 副乙H02ml 0.2ml 1稀释Ab 1:20 1401801:160132016401:1280生理 盐水 Ag加样方向 病人1:10血清 血清1:202m×4一第一列小孔 08ml吸管吹打3次」16m 生理盐水0.8ml混匀 8ml混匀1:400.2ml×4→第二列小孔 生理盐水08ml 0.8ml混匀 生理盐水0.8ml 1:80 2加Ag 3.45℃孵育30 4结果观察

微量板 1 2 3 4 5 6 7 8 伤寒O 0.2ml 0.2ml 伤寒H 0.2ml 0.2ml 副甲H 0.2ml 0.2ml 副乙H 0.2ml 0.2ml 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 生理 盐水 Ag 测 Ab 已知 未知 滴度 病人1：10血清 血清1：20 0.2ml×4 第一列小孔 0.8 ml 吸管吹打3次 1.6ml 生理盐水0.8 ml 混匀 0.8ml 混匀 1：40 0.2ml×4 第二列小孔 生理盐水0.8 ml 0.8ml 混匀 …… 生理盐水0.8 ml 1：80 …… Ag加样方向 1.稀释Ab 2.加Ag 3.45℃孵育30’ 4.结果观察

粪便标本肠道致病菌分离鉴别流程 标本 和球南的不同 已知Ab检测 未知Ag(玻片 凝集试验) 选择鉴别培养基 SS平板以 双糖管等 血清学鉴定 24h 生化反应 SS平板挑取可疑菌落2个 接种双糖管 培养观察 (无色透明,小)

粪便标本肠道致病菌分离鉴别流程 标本 选择鉴别培养基 SS平板 生化反应 血清学鉴定 双糖管等 已知Ab检测 未知Ag (玻片 凝集试验) SS 平板挑取可疑菌落2个 (无色,透明,小) 接种双糖管 培养,观察 37℃ 24h ？和球菌的不同

SS平板一分离肠道病原菌的强选择培养基 成分和作用 1.基础培养基:提供氮源和碳源 2.胆盐、枸橼酸钠、煌绿:可抑制肠道非致病菌的生长,而 对肠道致病菌抑制作用弱。 3乳糖,中性红(pH68-80,红→橙黄):致病菌不分 解乳糖,但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄色;大肠 杆菌分解乳糖产酸,菌落呈红色 病原菌小无色半透明 非致病菌:大红色 EMB( Eos in Methy I blue)平板一分离肠道病原菌 的弱选择培养基 病原菌透明无色 非致病菌紫黑色

SS平板－分离肠道病原菌的强选择培养基 成分和作用： 1. 基础培养基：提供氮源和碳源 2. 胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌的生长，而 对肠道致病菌抑制作用弱。 3. 乳糖，中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄） ：致病菌不分 解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄色；大肠 杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色 病原菌:小,无色,半透明 非致病菌:大,红色 病原菌:透明,无色 非致病菌:紫黑色 EMB（Eosin Methyl Blue)平板－分离肠道病原菌 的弱选择培养基

克氏双糖培养基 接种方法 如何观察 上层含乳糖部分 乳糖发酵:致病菌红色,非致病 菌黄色 乳糖 H 硫酸亚铁 固体 葡萄糖 然后观察下层 半固体 发酵葡萄糖(产酸产气) 指示剂:酚红 动力

克氏双糖培养基 • 接种方法 • 如何观察 – 上层含乳糖部分 • 乳糖发酵：致病菌红色，非致病 菌黄色 • H2S – 然后观察下层 • 发酵葡萄糖（产酸产气） • 动力 乳糖 硫酸亚铁 固体 葡萄糖 半固体 指示剂:酚红

乳糖葡萄糖动力硫化氫尿素酶 大肠杆菌黄色 痢疾杆菌红色 伤寒杆菌 红色 +/ 副伤寒杆菌红色 变形杆菌黄红色

乳糖 葡萄糖 动力 硫化氢 尿素酶 大肠杆菌 黄色 + - 痢疾杆菌 红色 + - - 伤寒杆菌 红色 + + +/- 副伤寒杆菌 红色 + + - 变形杆菌 红色 + + +

肠道致病菌粪便标本的分离与鉴定(续) 血清学反应 标本 已知Ab检测 选择鉴别培养基 未知Ag(玻片 凝集试验) 双糖管等 37℃ 血清学鉴定 24h 生化反应