佛山大学：《高级动物组织学》课程教学课件（实验讲义）冰冻切片制作及特殊染色

实验2冰冻切片制作及特殊染色第一部分冰冻切片制作一、实验前准备开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度（15-20℃）

实验2 冰冻切片制作及特殊染色 第一部分 冰冻切片制作 一、实验前准备 开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度（- 15-20 ℃）

取材解剖之后迅速取出所需的新鲜组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*），以防形成冰晶造成切片中形成形状不一的空泡，使细胞内结构移位

二、 取材 解剖之后迅速取出所需的新鲜组织，用干纱布或滤 纸擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*）,以防 形成冰晶造成切片中形成形状不一的空泡,使细胞内 结构移位

三、冷冻切片1、取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包理剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片（1~3分种）。2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。3、调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10μm间。4、调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，以切出完整、平滑的切片为准。切好的组织在于净的玻片上黏附时顺着一个方向稍微用力轻轻一带，可避免组织摊片过程中皱折，保证组织结构的完整及切片的美观

三、冷冻切片 1、取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上 冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片（1~3 分种）。 2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋 钮，将组织修平。 3、调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切， 纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10μ m间。 4、调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操 作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，以切出完 整、平滑的切片为准。切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向稍 微用力轻轻一带 ,可避免组织摊片过程中皱折 ,保证组织结构的完整及切 片的美观

四、染色同石蜡切片染色法

四、染色 同石蜡切片染色法

第二部分PAS反应

第二部分 PAS反应

一、目的和要求掌握PAS（高碘酸-希夫试剂D反应显示多糖的方法，了解多糖在细胞内的分布及其特性

一、目的和要求 掌握PAS(高碘酸-希夫试剂)反应显示多糖的方法，了解 多糖在细胞内的分布及其特性

二、实验原理糖元是动物体细胞内贮藏能量的多糖物质，尤其在肝细胞中含量丰富。PAS反应的化学基础是利用过碘酸将糖元氧化使葡萄糖分子中的2，3位碳原子之间的连接键打开，将其上的乙二醇基变为二醛基，醛基与雪夫试剂反应形成紫红色产物而显肝糖元

二、实验原理 糖元是动物体细胞内贮藏能量的多糖物质，尤其 在肝细胞中含量丰富。 PAS反应的化学基础是利用过碘酸将糖元氧化， 使葡萄糖分子中的2，3位碳原子之间的连接键打开， 将其上的乙二醇基变为二醛基，醛基与雪夫试剂反应 形成紫红色产物而显肝糖元

三、实验内容：1、肝脏的石蜡切片。2、切片肝糖原的PAS染色。3、镜下观察肝糖原的分布

三、实验内容： 1、肝脏的石蜡切片。 2、切片肝糖原的PAS染色。 3、镜下观察肝糖原的分布

四、实验步骤1、小白鼠肝脏石蜡切片2、切片脱水蜡（1）切片脱蜡后，经各级浓度酒精下降至蒸馏水(各类切片均可用)。二甲苯l5min一二甲苯5min→100%乙醇2min→95%乙醇2min→80%2min-70% 2 min(2)蒸馏水2分钟

四、实验步骤 1、小白鼠肝脏石蜡切片。 2、切片脱水蜡 （1）切片脱蜡后，经各级浓度酒精下降至蒸馏水 (各类切片均可用)。二甲苯I 5min →二甲苯II 5min →100%乙醇 2min→ 95%乙醇 2min→ 80% 2 min→70% 2 min (2)蒸馏水2分钟

3、高碘酸处理(3）0.7%高碘酸溶液处理12分钟4、希夫试剂染色(4）流水洗涤10分钟，蒸馏水过一下(5）移入希夫试剂中25分钟。(6）用偏亚硫酸钾溶液洗三次，每次2分钟

3、高碘酸处理 (3) 0．7％高碘酸溶液处理12分钟。 4、希夫试剂染色 (4) 流水洗涤10分钟，蒸馏水过一下 (5) 移入希夫试剂中25分钟。 (6) 用偏亚硫酸钾溶液洗三次，每次2分钟