佛山大学：《高级动物组织学》课程教学课件（实验讲义）石蜡切片制作及常规染色

实验1石蜡切片制作及常规染色步骤如下：1.取材与固定实验室常用的单一固定液是：4%甲醛（10%福尔马林）固定液乙醇、重铬酸钾也是切片制作常用的固定剂FoshanUniversity

Foshan University 实验1 石蜡切片制作及常规染色 步骤如下： 1．取材与固定 实验室常用的单一固定液是： 4％甲醛（10%福尔马林）固定液 乙醇、重铬酸钾也是切片制作常用的固定剂

2.修组织块与冲洗3.脱水与透明脱水的目的在于用乙醇（脱水剂）完全除去组织内水分。实验室常从70%乙醇开始脱水，80%、90%、95%至无水乙醇逐级更换，最后完全把组织中水分置换出来。常用的透明剂有二甲苯、苯、氯仿等。FoshanUniversity

Foshan University 2．修组织块与冲洗 3．脱水与透明 脱水的目的在于用乙醇（脱水剂）完全除去组织内水分。实验室常从70％乙醇开始脱 水，80％、90％、95％至无水乙醇逐级更换，最后完全把组织中水分置换出来。 常用的透明剂有二甲苯、苯、氯仿等

4.浸蜡与包埋浸蜡的目的在于除去组织中的二甲苯而代以石蜡。5.修蜡块和切片把包有组织块的长条蜡块，用单面刀片分割成以组织块为中心的正方形或长方形。6.展片与贴片把蜡片直接置于40-45℃C水中展片。FoshanUniversity

Foshan University 4．浸蜡与包埋 浸蜡的目的在于除去组织中的二甲苯而代以石蜡。 5．修蜡块和切片 把包有组织块的长条蜡块，用单面刀片分割成以组织块为中心的正方形或长方形。 6．展片与贴片 把蜡片直接置于40-45℃水中展片

7.染色教学和科研最常用的染色方法之一是苏木精一伊红（HE）染色。方法：①切片经二甲苯I、Ⅱ（各5min）脱蜡一无水乙醇I、Ⅱ（各2min）一→95%、80%、70%乙醇（各2min）一→蒸馏水洗去酒精，待染色。②苏木精染色将复水后的切片置于Delafield's苏木精原液中，染25min。自来水洗去残留染料5-10min→蒸馏水洗2min一1%盐酸酒精分色3-30s（严格控制时间）→自来水蓝化（30min～数小时，切片从淡紫红色转变为鲜艳的蓝色即可）一→蒸馏水洗2min，待染伊红。FoshanUniversity

Foshan University 7．染色 教学和科研最常用的染色方法之一是苏木精—伊红（HE）染色。 方法： ①切片经二甲苯Ⅰ、Ⅱ（各5 min）脱蜡 → 无水乙醇Ⅰ、Ⅱ（各2 min） → 95％、80％、70％ 乙醇（各2min） → 蒸馏水洗去酒精，待染色。 ②苏木精染色 将复水后的切片置于Delafield′s苏木精原液中，染25 min。 自来水洗去残留染料5-10min → 蒸馏水洗 2min→ 1％盐酸酒精分色3-30s（严格控制时 间） → 自来水蓝化（30 min～数小时，切片从淡紫红色转变为鲜艳的蓝色即可） → 蒸 馏水洗2min，待染伊红

③伊红染色从蒸馏水中取出切片，置于70%、80%、90%、95%乙醇中逐级脱水各2-5min一伊红酒精染色液1-5min一95%乙醇I、IⅡI1秒～1min一→无水乙醇I、I各2min一二甲苯I、ⅡI透明各5min。8.封片FoshanUniversity

Foshan University ③伊红染色 从蒸馏水中取出切片，置于70％、80％、90%、95％乙醇中逐级脱水各2-5 min → 伊红酒精染色液1-5min→ 95％乙醇Ⅰ、Ⅱ1秒～1 min → 无水乙醇Ⅰ、Ⅱ各2min → 二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明各5min。 8．封片