华南农业大学：《遗传学》课程教学资源（课件讲稿）第5章 基因的克隆（分离）

国家精品课程 第五章基因的克隆 (分离)（补充） 分子遗传学基础 遗传作图 物理作图 基因克隆 基因表达 基因工程

遗传学 Genetics 国家精品课程 第五章 基因的克隆（分离）（补充） 分子遗传学基础 遗传作图 物理作图 基因克隆 基因表达 基因工程

用家精品课程 基因克隆（分离）主要方法 1.鸟枪法(shot gun.)(基因文库技术分 离目的基因) 2.PCR技术 3.反转录技术(mRNA差别显示技术分离差 别表达基因) 4.图位克隆技术

国家精品课程 基因克隆（分离）主要方法 1.鸟枪法（shot gun）（基因文库技术分 离目的基因） 2.PCR技术 3.反转录技术（mRNA差别显示技术分离差 别表达基因） 4.图位克隆技术 遗传学 Genetics

角家精品得程 5.基因芯片技术分离目的基因 6.功能蛋白组分离目的基因 7.插入突变分离克隆目的基因 8.酵母双杂交系统分离克隆基因 9.生物信息学在分离克隆基因中的应用 10.基因分离克隆的新技术

国家精品课程 5.基因芯片技术分离目的基因 6.功能蛋白组分离目的基因 7.插入突变分离克隆目的基因 8.酵母双杂交系统分离克隆基因 9.生物信息学在分离克隆基因中的应用 10.基因分离克隆的新技术 遗传学 Genetics

用家精品课程 第10章遗传工程-10.2 基因工程 1.鸟枪法(shot gun.)(基因文库技术分 离目的基因) DNA→相当于基因大小的片段→与载 体重组→细菌→筛选所需的基因

遗传学 Genetics 国家精品课程 1.鸟枪法（shot gun）（基因文库技术分 离目的基因） DNA →相当于基因大小的片段→与载 体重组→细菌→筛选所需的基因。 第10章 遗传工程- 10.2 基因工程

角家精品得程 第10章遗传工程-一10.2 基因工程 (1)使用限制性内切酶将带有目的基因的DNA链切 成若干小段。 (2)再使用DNA连接酶将其整合到载体的基因中， 并使其表达。 (3)如果在某个细胞中得到了目的产物，就说明整 合到该细胞中的DNA片段就是所需要的DNA片段

遗传学 Genetics 国家精品课程 (1) 使用限制性内切酶将带有目的基因的DNA链切 成若干小段。 (2) 再使用DNA连接酶将其整合到载体的基因中, 并使其表达。 (3) 如果在某个细胞中得到了目的产物,就说明整 合到该细胞中的DNA片段就是所需要的DNA片段。 第10章 遗传工程- 10.2 基因工程

用家精品课程 2.PCR技术（化学合成方法之一） 如果基因的两端部分序列已知，根据 已知序列设计引物，从基因组DNA或cDNA 中通过PCR技术可以获得目的基因。 同源序列克隆

国家精品课程 2.PCR技术(化学合成方法之一) 如果基因的两端部分序列已知，根据 已知序列设计引物，从基因组DNA 或cDNA 中通过PCR技术可以获得目的基因。 同源序列克隆 遗传学 Genetics

角家精品得程 实例： 甘蔗△1-吡咯啉-5羧酸合成酶(ScP5CS)基 因克隆。主要步骤如下： 1.设计引物.根据NCB引数据库P5CS保守 序列设计20-24bp的一对引物； 2.甘蔗叶片总DNA提取 3.PCR扩增 4.目的片段测序 5.转化验证

国家精品课程 实例: 甘蔗Δ1-吡咯啉-5羧酸合成酶(ScP5CS)基 因克隆。主要步骤如下: 1. 设计引物.根据NCBI数据库P5CS保守 序列设计20-24bp的一对引物; 2. 甘蔗叶片总DNA提取 3. PCR扩增 4. 目的片段测序 5. 转化验证 遗传学 Genetics

用家精品课程 3.反转录技术(mRNA差别显示技术分离差别 表达基因)

国家精品课程 3.反转录技术（mRNA差别显示技术分离差别 表达基因） 遗传学 Genetics

角家精品得程 cDNA:反转录DNA 人 DNA 转录.M mRNA 反转录，cDNA 如果已知基因的特异mRNA,就可以直接利用 该mRNA反转录cDNA（基因)。 1H

遗传学 Genetics 国家精品课程 cDNA：反转录DNA 如果已知基因的特异mRNA，就可以直接利用 该mRNA反转录cDNA（基因）。 DNA 转录 mRNA 反转录 cDNA

用家精品课程 mRNA差别显示技术分离差别表达基因 将mRNA反转录与PCR技术结合发展起来 的一种RNA指纹图谱技术。它利用5’锚定 引物o1igo(dT)12MN和3’端随机引物对 总mRNA进行PCR扩增，以期得到差异表达的 条带。并对其差异显示的条带进行回收、 克隆

国家精品课程 mRNA差别显示技术分离差别表达基因 将mRNA反转录与PCR技术结合发展起来 的一种RNA指纹图谱技术。它利用5’锚定 引物oligo（dT）12MN和3’端随机引物对 总mRNA进行PCR扩增，以期得到差异表达的 条带。并对其差异显示的条带进行回收、 克隆。 遗传学 Genetics