华南农业大学：《遗传学》课程教学资源（实验指导）实验6 植物有丝分裂染色体制备

实验6植物有丝分裂染色体制备 一、实验目的 主要掌握有丝分裂染色体制片技术：了解有丝分裂各个时期染色体的特征 二、实验原理 各种生长旺盛的植物组织，如根尖、茎尖、愈伤组织等常进行着活跃的细胞分裂。通过对 材料进行适当的园定处理，酶解和染色，就可以在显微镜下观察到细胞内染色体的变化过程。 有丝分裂中期的染色体长度较短，具有典型的形态特征，易于记数和分析。因此，在细胞 的分裂过程中，进行药物或冰冻处理，可阻止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期。同时，对 组织细胞进行酸性水解或酶解处理，降解细胞之间的果胶质和细胞的纤维素壁，使细胞易于散开。 三、实验材料、器具及试剂 大麦、玉米及洋葱等根尖 显微镜、水浴锅、镊子、载玻片、盖玻片、小瓶、酒精灯、滤纸等。 0.0028-羟基喹林水溶液（或饱和对二氯苯水溶液，或饱和a-溴萘水溶液）：0.075C1溶液： 95%乙醇冰醋酸=3：1固定液：2.5%纤维素酶和2.0%果胶酶水溶液：Giemsa母液： 1/15 sorensen's磷酸缓冲液(p6.8) 四、实验步骤 1、浸种催芽：取少许种子放入培养皿中，加水浸没，于30℃左右浸种1一2天。当种子萌动时， 把水倒去，在铺有湿滤纸的培养皿中催芽。 2、预处理：根长至0.5-1.0cm时切取根尖，投入0.002M8-羟基喹林水溶液中处理：18℃，1-1.5励。 3、前低渗：吸去预处理液，加入0.075NKC1,或水低渗处理10-30min。 4、固定：用甲醇（或95%乙醇）：冰醋酸=3：1固定30mi以上，也可固定后放入4℃冰箱保存。 水洗3次，每次10min。 5、酵解：加入2.5%纤维素酶和2.0%果胶酶水溶液，在37℃酶解处理70-120min(根据软化 程度而定)。 6、后低渗：倒去酶液后用蒸馏水冲洗2-3次，在水中停留30加in以上，即可直接用于制片。也 可换入周定液保存

实验 6 植物有丝分裂染色体制备 一、实验目的 主要掌握有丝分裂染色体制片技术；了解有丝分裂各个时期染色体的特征。 二、实验原理 各种生长旺盛的植物组织，如根尖、茎尖、愈伤组织等常进行着活跃的细胞分裂。通过对 材料进行适当的固定处理，酶解和染色，就可以在显微镜下观察到细胞内染色体的变化过程。 有丝分裂中期的染色体长度较短，具有典型的形态特征，易于记数和分析。因此，在细胞 的分裂过程中，进行药物或冰冻处理，可阻止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期。同时，对 组织细胞进行酸性水解或酶解处理，降解细胞之间的果胶质和细胞的纤维素壁，使细胞易于散开。 三、实验材料、器具及试剂 大麦、玉米及洋葱等根尖。 显微镜、水浴锅、镊子、载玻片、盖玻片、小瓶、酒精灯、滤纸等。 0.002M8－羟基喹林水溶液（或饱和对二氯苯水溶液，或饱和α-溴萘水溶液）；0.075MKCl 溶液； 95％乙醇:冰醋酸＝3:1 固定液；2.5％纤维素酶和 2.0％果胶酶水溶液；Giemsa 母液； 1/15Msorensen′s 磷酸缓冲液(pH6.8) 四、实验步骤 1、浸种催芽：取少许种子放入培养皿中，加水浸没，于 30℃左右浸种 1－2 天。当种子萌动时， 把水倒去，在铺有湿滤纸的培养皿中催芽。 2、预处理：根长至 0.5-1.0cm 时切取根尖，投入 0.002M8-羟基喹林水溶液中处理；18℃，1-1.5h。 3、前低渗：吸去预处理液，加入 0.075M KCl，或水低渗处理 10-30min。 4、固定：用甲醇（或 95％乙醇）:冰醋酸＝3:1 固定 30min 以上，也可固定后放入 4℃冰箱保存。 水洗 3 次，每次 10min。 5、酶解：加入 2.5％纤维素酶和 2.0％果胶酶水溶液，在 37℃酶解处理 70－120min（根据软化 程度而定）。 6、后低渗：倒去酶液后用蒸馏水冲洗 2－3 次，在水中停留 30min 以上，即可直接用于制片。也 可换入固定液保存。 1

7、火焰干燥制片：放2一3个根尖在载片上，加一小滴固定液，用镊子将根尖敲醉至浆状。再滴 2一3滴周定液，迅速用镊子夹住载片在酒精灯火焰上加热至着火，然后吹灭火焰。载片在空气 中自然干燥」 8、染色：Giemsa染色液染色，1-3h。自来水冲洗，晾干。 五、作业 1、制备分散良好的染色体制片。 2、绘出有丝分裂各时期的简图。 附：Giemsa(吉姆莎)染液配制 磷酸缓冲液(pH6.8): A液：1/15磷酸二氢钾：称取P0,9.118g溶于1000m1蒸馏水中 B液：1/15磷酸氢二钠：称取NaP0.2H011.876g溶于1000m1蒸偏水中。 使用时按A:B=51:49即配成pH6.8磷酸缓冲液。 Giemsa母液： 取Giemsa粉剂0.5g,加少量甘油研磨至无颗粒（约30分钟以上），再加入甘油共达33ml, 放在56℃温箱或水浴内2小时，促使溶化，冷却后加入甲醇33m1,室温下放置2一3周后，过滤 使用。 用时将Giesa母液用磷酸缓冲液1：20稀释，应随用随配

7、火焰干燥制片：放 2－3 个根尖在载片上，加一小滴固定液，用镊子将根尖敲碎至浆状。再滴 2－3 滴固定液，迅速用镊子夹住载片在酒精灯火焰上加热至着火，然后吹灭火焰。载片在空气 中自然干燥。 8、染色：Giemsa 染色液染色，1－3h。自来水冲洗，晾干。 五、作业 1、制备分散良好的染色体制片。 2、绘出有丝分裂各时期的简图。 附： Giemsa （吉姆莎）染液配制 磷酸缓冲液(pH6.8)： A液：1/15 磷酸二氢钾：称取KH2PO4 9.118g溶于 1000ml蒸馏水中。 B液：1/15 磷酸氢二钠：称取Na2HPO4.2H2O11.876g溶于 1000ml蒸馏水中。 使用时按 A：B＝51：49 即配成 pH6.8 磷酸缓冲液。 Giemsa 母液： 取 Giemsa 粉剂 0.5g，加少量甘油研磨至无颗粒(约 30 分钟以上），再加入甘油共达 33ml, 放在 56℃温箱或水浴内 2 小时，促使溶化。冷却后加入甲醇 33ml，室温下放置 2－3 周后，过滤 使用。 用时将 Giemsa 母液用磷酸缓冲液 1：20 稀释，应随用随配。 2