南方医科大学：《生物化学》课程教学课件（PPT讲稿）第一章 重组DNA技术的基本原理（主讲：李凌）

二、重组DA技术的基本原理 1.且的基因的获取 2.克隆载体的选择与构建 g 3.外源基因与载体的连接 4.重组DNA导入受体菌 5.重组体的筛选 6.克隆基因的表达

二、重组DNA技术的基本原理 1. 目的基因的获取 2. 克隆载体的选择与构建 3. 外源基因与载体的连接 4. 重组DNA导入受体菌 5. 重组体的筛选 6. 克隆基因的表达

1.Foreign DNA Gene of interest to be inserted 2.Vector: plasmid pBR322 3.Marker: Antibiotic resistance gene Ligation Recombinant DNA molecule

Introduction into host cell Host cell DNA 98 N Selection for cells containing recombinant DNA molecules by growth in the presence of antibiotic 米

(一)目的基因的获取 1.化学合成法 2.基因组DNA 3.CDNA 4.聚合酶链反应

(一)目的基因的获取 1. 化学合成法 2. 基因组DNA 3. cDNA 4. 聚合酶链反应

基本烧念 基因(gene):P219 基因组(genome):P292 ·基因组学(genomics) 研究基因组的结构、信息与功能的 科学。 ·基因组计划：HGP—P440 后基因组 功能基因组

基本概念 • 基因（gene）：P219 • 基因组（genome）：P292 • 基因组学（genomics）： 研究基因组的结构、信息与功能的 科学。 • 基因组计划：HGP——P440 • 后基因组 • 功能基因组

基因女库 基因组DNA文库 (genomic DNA library) ●cDNA文库 (CDNA library)

基因文库 • 基因组DNA文库 (genomic DNA library) • cDNA文库 (cDNA library)

human DNA CLEAVE WITH RESTRICTION NUCLEASE @ millions of genomic DNA fragments DNA FRAGMENTS INSERTED INTO PLASMIDS INTRODUCTION OF PLASMIDS INTO BACTERIA @a8g0 genomic library

Cellular Bacteriophages genome Cleave with Extract DNA. restriction enzyme. Cleave Ligate Recombinant DNA Hybrid phages as29 aa98e2ss分 IImIm

Bacterium Infection Lysis Plaque Lawn of bacterium Phage clone in plaque Library of phage clones es20sadeceassge

聚合酶链反(PCR) Polymerase Primer 1 +DNA Primer Primer 2 dNTPS Chain DNA-Polymerase Proben-DNA Denaturieren 95C Reaction Synthese~45C Cycle 1 。 基本原理： Denaturieren 95C Cycle 2 Synthese~45C 变性、 退火、 Cycle 3 延伸 10i

聚合酶链反应（PCR） • Polymerase Chain Reaction • 基本原理： 变性、 退火、 延伸