《果树育种学各论》课程教学资源（教案讲义）实验八 花粉生活力的测定

实验八花粉生活力的测定在杂交育种、结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。一、实验目的学习并掌握花粉生活力测定方法二、实验方法（一）碘-碘化钾染色测定法【原理】多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。【试剂】I2-KI溶液：取2gKI溶于5~10ml蒸馏水中，加入1gI2，待完全溶解后，再加蒸留水300ml。贮于棕色瓶中备用。【方法】采集成熟花药，取一花药于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I2-KI溶液，盖上盖玻片，在显微镜下观察。凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。【注意事项】此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。因为三核期退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反应。另外，含有淀粉而被杀死的花粉粒遇I2-KI也呈蓝色。（二）氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的NADH2或NADPH2可将无色的TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯甲）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。溶液避光保存，若发红时，则不能再用。【方法】采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。三、思考题1.上述每一种方法是否适合于所有植物花粉活力的测定？2.哪一种方法更能准确反映花粉的活力？

实验八 花粉生活力的测定 在杂交育种、结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。掌握花粉活力快速测定的方法，是进行 雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。 一、 实验目的 学习并掌握花粉生活力测定方法 二、 实验方法 （一）碘-碘化钾染色测定法 【原理】 多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2 -KI溶液可将其染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸 形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2 -KI溶液染色呈黄褐色。因此，可用I2 -KI溶液染色来测定花粉活力。 【器材与用具】 显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。 【试剂】 I2 -KI溶液：取2g KI溶于5～10ml蒸馏水中，加入1g I2，待完全溶解后，再加蒸镏水300ml。贮于棕色瓶中备用。 【方法】 采集成熟花药，取一花药于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I2 -KI溶 液，盖上盖玻片，在显微镜下观察。凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的 花粉粒。观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。 【注意事项】 此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。因为三核期退化的花粉已有淀粉 积累，遇碘呈蓝色反应。另外，含有淀粉而被杀死的花粉粒遇I2 -KI也呈蓝色。 （二）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 【原理】 具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的NADH2或NADPH2可将无色的TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）还原 成红色的TTF（三苯甲 ）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC的颜色变化不明显，故可根据花粉吸 收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。 【器材与用具】 显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。 【试剂】 0.5%TTC溶液：称取0.5g TTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。溶液避光 保存，若发红时，则不能再用。 【方法】 采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温 箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。观察2~3张片 子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。 三、思考题 1.上述每一种方法是否适合于所有植物花粉活力的测定？  2.哪一种方法更能准确反映花粉的活力？