石河子大学：《仪器分析》课程PPT教学课件（药学专业）高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography, HPLC

第二十一章 高数液相色清 High Performance Liquid Chromatography, HPLC High Pressure Liquid Chromatography,HPLC

High Performance Liquid Chromatography, HPLC High Pressure Liquid Chromatography, HPLC 第二十一章 高效液相色谱

桡述 经典的液相色谱法与现代液相色谱法的比较 1.流动相的输送形式不同。 2.分析周期不同。 3.柱效不同。 高效液相色谱法具有高柱效、高选择性、 分析速度快、灵敏度高、重复性好、应用范 围广等优点

一 概 述 经典的液相色谱法与现代液相色谱法的比较 1.流动相的输送形式不同。 2.分析周期不同。 3.柱效不同。 高效液相色谱法具有高柱效、高选择性、 分析速度快、灵敏度高、重复性好、应用范 围广等优点

第二节右数液相色谱的分美 根据分离机制不同，液相色谱可分为： 液固吸附色谱 液液分配色谱 化合键合色谱 离子交换色谱 分子排阻色谱

第二节 高效液相色谱的分类 根据分离机制不同，液相色谱可分为： 液固吸附色谱 液液分配色谱 化合键合色谱 离子交换色谱 分子排阻色谱

基库原理 分离系统也由两相一固定相和流动相组成 液相色谱的固定相可以是吸附剂、 化学键合固定相（或在惰性载体表面涂 上一层液膜)、离子交换树脂或多孔性 凝胶；流动相是各种溶剂。 根据各组分在固定相及流动相中的 吸附能力、分配系数、离子交换作用或 分子尺寸大小的差异进行分离

基本原理 分离系统也由两相—固定相和流动相组成 液相色谱的固定相可以是吸附剂、 化学键合固定相（或在惰性载体表面涂 上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性 凝胶；流动相是各种溶剂。 根据各组分在固定相及流动相中的 吸附能力、分配系数、离子交换作用或 分子尺寸大小的差异进行分离

液相色谱与气相色谱的比较 相同点：液相色谱所用基本概念：保留值、塔板 数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱 一致。液相色谱所用基本理论：塔板理论与速 率方程也与气相色谱基本一致。 不同点：(1)应用范围不同 气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不 分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、 热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分 离、分析较为困难。 液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限 制，它非常适合分子量较大、难气化、不易挥 发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物 的分离分析

液相色谱与气相色谱的比较 相同点：液相色谱所用基本概念：保留值、塔板 数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱 一致。液相色谱所用基本理论：塔板理论与速 率方程也与气相色谱基本一致。 不同点：（1）应用范围不同 气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不 分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、 热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分 离、分析较为困难。 液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限 制，它非常适合分子量较大、难气化、不易挥 发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物 的分离分析

(2)液相色谱能完成难度较高的分离工作 气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，不参与 分配平衡过程。 液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分 子，为提高选择性增加了一个因素。 液相色谱固定相类型多，作为分析时选择余地 大；而气相色谱并不可能的。 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一 般有利于色谱分离条件的选择。 (3)液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容 易，而且回收是定量的，适合于大量制备。但液 相色谱尚缺乏通用的检测器，仪器比较复杂，价 格昂贵。在实际应用中，这两种色谱技术是互相 补充的

（2）液相色谱能完成难度较高的分离工作 气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，不参与 分配平衡过程。 液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分 子，为提高选择性增加了一个因素。 液相色谱固定相类型多，作为分析时选择余地 大；而气相色谱并不可能的。 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一 般有利于色谱分离条件的选择。 （3）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容 易，而且回收是定量的，适合于大量制备。但液 相色谱尚缺乏通用的检测器，仪器比较复杂，价 格昂贵。在实际应用中，这两种色谱技术是互相 补充的

Van Deemter方程式 气一液色谱填充柱：H=A+B/U+CU 毛细管开口柱：HB/U+CU 高效液相色谱：H=A+CU 流动相的流速是U最佳的3~4倍，促 使纵向扩散项减小可忽略不计。因此， 流动相的流速于板高成直线关系，流速 增大，板高增加，柱效降低，为了兼顾 柱效与分析速度，一般都尽可能地采用 较低流速

Van Deemter方程式 气－液色谱填充柱：H=A+B/U+CU 毛细管开口柱：H=B/U+CU 高效液相色谱：H=A+CU 流动相的流速是U最佳的3～4倍，促 使纵向扩散项减小可忽略不计。因此， 流动相的流速于板高成直线关系，流速 增大，板高增加，柱效降低，为了兼顾 柱效与分析速度，一般都尽可能地采用 较低流速

液一国吸附色谱法 液固色谱法是根据各组分在固定相上 的吸附能力的差异进行分离。 吸附剂是一些多孔的固体颗粒物质，吸附试样 的能力，主要取决于吸附剂的比表面积和理化性 质，试样的组成和结构以及洗脱液的性质等。 一、液固色谱法固定相 固体吸附剂按其性质可分为极性和非极性两种 类型。极性吸附剂包括硅胶、氧化铝、氧化镁、 硅酸镁、分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常 见的是活性炭。各种吸附剂中，最常用的吸附剂 是硅胶，其次是氧化铝

液—固吸附色谱法 液固色谱法是根据各组分在固定相上 的吸附能力的差异进行分离。 吸附剂是一些多孔的固体颗粒物质，吸附试样 的能力，主要取决于吸附剂的比表面积和理化性 质，试样的组成和结构以及洗脱液的性质等。 一、液固色谱法固定相 固体吸附剂按其性质可分为极性和非极性两种 类型。极性吸附剂包括硅胶、氧化铝、氧化镁、 硅酸镁、分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常 见的是活性炭。各种吸附剂中，最常用的吸附剂 是硅胶，其次是氧化铝

液固色谱法流动相必须符合下列要求： (1)能溶解样品，但不能与样品发生反应。 (2)与固定相不互溶，也不发生不可逆反应。 (3)粘度要尽可能小，这样才能有较高的渗透性 和柱效。 (4)应与所用检测器相匹配。例如利用紫外检测 器时，溶剂要不吸收紫外光。 (5)容易精制、纯化、毒性小，不易着火、价格 尽量便宜等。 在液-固色谱中，选择流动相的基本原则是极性大 的试样用极性较强的流动相，极性小的则用低极性 流动相

液固色谱法流动相必须符合下列要求： （1）能溶解样品，但不能与样品发生反应。 （2）与固定相不互溶，也不发生不可逆反应。 （3）粘度要尽可能小，这样才能有较高的渗透性 和柱效。 （4）应与所用检测器相匹配。例如利用紫外检测 器时，溶剂要不吸收紫外光。 （5）容易精制、纯化、毒性小，不易着火、价格 尽量便宜等。 在液-固色谱中，选择流动相的基本原则是 极性大 的试样用极性较强的流动相，极性小的则用低极性 流动相

液液分配色谱法 在液液色谱中，一个液相作为流动相，而另一 个液相则涂渍在很细惰性载体或硅胶上作为固定 相。流动相与固定相应互不相溶，两者之间应有 一明显的分界面。分配系数(K)或分配比（) 小的组分，保留值小，先流出柱。 一、固定相 (1)表面多孔型载体（薄壳型微珠载体），由直径 为30~40um的实心玻璃球和厚度约为1~2um 的多孔性外层所组成

液液分配色谱法 在液液色谱中，一个液相作为流动相，而另一 个液相则涂渍在很细惰性载体或硅胶上作为固定 相。流动相与固定相应互不相溶，两者之间应有 一明显的分界面。分配系数（K）或分配比（k） 小的组分，保留值小，先流出柱。 一、固定相 （1）表面多孔型载体（薄壳型微珠载体），由直径 为30 ～ 40m的实心玻璃球和厚度约为1 ～2 m 的多孔性外层所组成