《生化技术》课程教学资源（PPT课件讲稿）第六章 化学检测

第六章化学检测 ■根据物质的化学性质而对物质进行定量 定性测定。 应用最早、最广泛的检测技术 ■简便、快速、操作容易

第六章 化学检测 ◼ 根据物质的化学性质而对物质进行定量、 定性测定。 ◼ 应用最早、最广泛的检测技术 ◼ 简便、快速、操作容易

糖类的化学检测 ■糖类包括多糖、双糖、单糖 单糖和某些双糖具有游离羰基—还原糖 多糖和蔗糖等无还原性—非还原糖 糖类化学检测主要是利用游离羰基的还原 性质,与试剂(氧化剂)进行氧化还原反 应而进行测定的 非还原糖必须转化为还原糖再进行测定

一 糖类的化学检测 ◼ 糖类包括多糖、双糖、单糖 ◼ 单糖和某些双糖具有游离羰基——还原糖 ◼ 多糖和蔗糖等无还原性——非还原糖 ◼ 糖类化学检测主要是利用游离羰基的还原 性质，与试剂（氧化剂）进行氧化还原反 应而进行测定的。 ◼ 非还原糖必须转化为还原糖再进行测定

最常用的试剂:斐林( Fehling)试剂 基本组成:A:CuSO4溶液 B:NaOH和酒石酸钾钠溶 液 使用时A、B等体积混合(生成 酒石酸钾钠铜) 酒石酸钾钠铜是氧化剂,可与还原糖的 游离羰基发生氧化还原反应,而进行糖 的测定

◼ 最常用的试剂：斐林（Fehling）试剂 ◼ 基本组成：A：CuSO4溶液 B: NaOH和酒石酸钾钠溶 液 使用时A、B等体积混合(生成 酒石酸钾钠铜） ◼ 酒石酸钾钠铜是氧化剂，可与还原糖的 游离羰基发生氧化还原反应，而进行糖 的测定

定糖常用方法 兰—爱农( ( Lane-Eynon)法 ■次甲基蓝(亚甲基蓝、四甲基蓝)法、置换法 直接滴定法 反应终点用次甲基蓝指示剂显示(还原糖滴定 斐林试剂,由于次甲基蓝氧化能力比二价铜弱, 待二价铜全部还原后,过量1D还原糖使次甲基 蓝还原,蓝色消失) 多糖或其他非还原糖需转化为还原糖后再滴定 如淀粉,可用酸解或酶解

定糖常用方法 ◼ 1 兰——爱农（Lane-Eynon）法 ◼ 次甲基蓝（亚甲基蓝、四甲基蓝）法、置换法、 直接滴定法 ◼ 反应终点用次甲基蓝指示剂显示（还原糖滴定 斐林试剂，由于次甲基蓝氧化能力比二价铜弱， 待二价铜全部还原后，过量1D还原糖使次甲基 蓝还原，蓝色消失） ◼ 多糖或其他非还原糖需转化为还原糖后再滴定 如淀粉，可用酸解或酶解

操作要点 1)斐林试剂的标定 (a)标定预备试验 A、B各5mL+10mL水(250mL三角瓶中)摇匀 加热至沸腾,十2D1%次甲基蓝溶液,用标准葡 萄糖液滴定至蓝色消失,耗标准葡萄糖液(O.1 %或02%)V1mL (b)标定 A、B各5mL+10mL水(250m三角瓶中)摇匀 从滴定管中预先加入(V1-1)mL标准葡萄糖液, 摇匀后加热加热至沸腾,十2D1%次甲基蓝溶液 用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失(滴定在1min 内完成),记录消耗标准葡萄糖液的总毫升数

操作要点 ◼ （1 ）斐林试剂的标定 ◼ （a）标定预备试验 A、B各5mL＋10mL水（250mL三角瓶中）摇匀， 加热至沸腾，＋2D1％次甲基蓝溶液，用标准葡 萄糖液滴定至蓝色消失，耗标准葡萄糖液（0.1 ％或0.2％）V1mL。 ◼ （b）标定 ◼ A、B各5mL＋10mL水（250mL三角瓶中）摇匀， 从滴定管中预先加入（V1 -1)mL标准葡萄糖液， 摇匀后加热加热至沸腾，＋2D1％次甲基蓝溶液， 用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失（滴定在1min 内完成），记录消耗标准葡萄糖液的总毫升数 V0

■(2)定糖 (a)定糖预备试验 A、B各5mL+10m样品糖液(250mL三角瓶 中)摇匀,加热至沸腾,+2D1%次甲基蓝溶 液,用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失,耗标准 葡萄糖液(0.1%或0.,2%)V2mL (b)定糖 ■A、B各5mnL+10mL样品糖液(250mL三角瓶 中)摇匀,补加(V√V2)mL水,并从滴定管 中预先加入(V2-1)m标准葡萄糖液,摇匀后 加热加热至沸腾,十2D1%次甲基蓝溶液,用 标准葡萄糖液滴定至蓝色消失(滴定在1mi内 完成),记录消耗标准葡萄糖液的总毫升数∨

◼ (2) 定糖 ◼ （a）定糖预备试验 ◼ A、B各5mL＋10mL样品糖液（250mL三角瓶 中）摇匀，加热至沸腾，＋2D1％次甲基蓝溶 液，用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失，耗标准 葡萄糖液（0.1％或0.2％）V2mL。 ◼ （b）定糖 ◼ A、B各5mL＋10mL样品糖液（250mL三角瓶 中）摇匀，补加（V0 -V2）mL水，并从滴定管 中预先加入（V2 -1)mL标准葡萄糖液，摇匀后 加热加热至沸腾，＋2D1％次甲基蓝溶液，用 标准葡萄糖液滴定至蓝色消失（滴定在1min内 完成），记录消耗标准葡萄糖液的总毫升数V

■(3)计算 ■还原糖含量(以葡萄糖计) (V0)×c×(1/10)×n 注意: (a)AB分开储存,防止Cu++变化,临用混合 (b)单标移液管吸液准确,外壁也需擦干净 (C)体积需控制在一定范围内,对pH有影响 (d)煮沸时间要一致 (e)注意指示剂加入时间和加入量一致 (f)滴定速度一致(后滴定0.5~1mL,1min 内完成) (g)产物Cu2O不稳定,次甲基蓝变色也不稳 定,暴露于空气或沸腾颜色变化,滴定过程不 能摇动,不可中途中止加热

◼ (3) 计算 ◼ 还原糖含量（以葡萄糖计） ＝（V0-V) × c × (1/10 )×n ◼ 注意： ◼ （a）AB分开储存，防止Cu++变化，临用混合 ◼ （b）单标移液管吸液准确，外壁也需擦干净 ◼ （c）体积需控制在一定范围内，对pH有影响 ◼ （d）煮沸时间要一致 ◼ （e）注意指示剂加入时间和加入量一致 ◼ （f）滴定速度一致（后滴定0.5～1mL，1min 内完成） ◼ （g）产物Cu2O不稳定，次甲基蓝变色也不稳 定，暴露于空气或沸腾颜色变化，滴定过程不 能摇动，不可中途中止加热

十斐林试剂快速法: 在斐林试剂中加入亚铁氰化钾(黄血盐) 反应终点为蓝色消失,淡黄色出现。反 应终点比兰一爱农法更为明显

◼ 斐林试剂快速法： ◼ 在斐林试剂中加入亚铁氰化钾（黄血盐） 反应终点为蓝色消失，淡黄色出现。反 应终点比兰－爱农法更为明显

2碘量法 I2→NaIo(氧化剂),其氧化能力较弱, 又适用于醛糖的测定,与酮糖不起反应 操作要点: (1)标准硫代硫酸钠溶液配制,0.05 mo/L,沸腾后冷却水配制,存放在棕色 瓶中,一周后用标准重铬酸钾标定。 (2)标准碘液配制,0.1mo/ 3)空白滴定:空白液,用硫代硫酸钠 滴定试剂中全部碘

2 碘量法 ◼ I2→ NaIO(氧化剂），其氧化能力较弱， 仅适用于醛糖的测定，与酮糖不起反应 ◼ 操作要点： ◼ （1）标准硫代硫酸钠溶液配制，0.05 mol/L，沸腾后冷却水配制，存放在棕色 瓶中，一周后用标准重铬酸钾标定。 ◼ （2）标准碘液配制，0.1mol/L ◼ （3）空白滴定：空白液，用硫代硫酸钠 滴定试剂中全部碘

碘量瓶中,10mL0.1mol/碘液+15mL0.1 mo/ NAoh+5m空白液,摇匀后暗反应15mn+ imL1mo/硫酸溶液,用0.05mo/L硫代硫酸钠滴 定至浅黄色,加0.2mL0.5%淀粉液作指示剂,滴定 至蓝色消失,记录 (4)样品滴定:以5m样品液代替空白液,V1 (5)计算 醛糖含量=(V—V1)C×M× ■注意:暗反应后需酸化再滴定,滴定时开始轻摇 (碘挥发),后再摇(淀粉吸附碘) ■配合次甲基蓝法测定某些糖含量(如果糖)

◼ 碘量瓶中，10mL0.1mol/L碘液＋15mL0.1 mol/LNaOH＋5mL空白液，摇匀后暗反应15min＋ 1mL1mol/L硫酸溶液，用0.05mol/L硫代硫酸钠滴 定至浅黄色，加0.2mL0.5％淀粉液作指示剂，滴定 至蓝色消失，记录V0 ◼ (4)样品滴定：以5mL样品液代替空白液， V1 ◼ (5) 计算： ◼ 醛糖含量＝ （V0 － V1）C× M × n ◼ 注意：暗反应后需酸化再滴定，滴定时开始轻摇 （碘挥发），后再摇（淀粉吸附碘） ◼ 配合次甲基蓝法测定某些糖含量（如果糖）