南京农业大学：《食品微生物学》课程教学课件（讲稿）实验四 微生物细胞大小和数量的测定

实验四微生物细胞大小和数量的测定 目的要求 实验材料 实验程序 思考题

实验四 微生物细胞大小和数量的测定 • 目的要求 • 实验材料 • 实验程序 • 思考题

目的要求 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显 微镜下测定微生物大小的方法。 学习使用血球记数板测定微生物数量的 方法

目的要求 • 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显 微镜下测定微生物大小的方法。 • 学习使用血球记数板测定微生物数量的 方法

实验材料 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、细菌 染色片、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻 片、无菌滴管、西水纸、擦镜纸、香柏 油、二甲苯

实验材料 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、细菌 染色片、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻 片、无菌滴管、西水纸、擦镜纸、香柏 油、二甲苯

实验程序 测定微生物的大小 测定微生物数量

实 验程序 • 测定微生物的大小 • 测定微生物数量

实验程序:测定微生物的大小 测定的工具:目镜测微尺镜台测微尺 m)时 目镜测微尺 镜台测微尺利用目镜测微尺测定镜镜台测微尺 台测微尺的每格绝对值测定微生物大小 B C 图5-1目镜测微尺(A)、镜台测微尺(B)及其校正(C)与测量(D)

实验程序：测定微生物的大小 测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺

实验程序:测定微生物的大小 日镜测微尺的校正:在高倍镜下,看清镜台测微尺的刻度后, 转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行,移动推动 器,使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合,然 后,仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜 测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每 格长1μm,所以可得: 目镜测微尺每格长度(ψm)=(镜台测微尺格数Ⅹ10)/目镜 测微尺格数 注意:校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件(特定的 接物镜、接目镜、镜筒长度等)进行,而且只能在这特定的情 况下才可重复使用。 菌体大小的测定:取下镜台测微尺,将细菌染色标本置于载物 台上,然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽

实验程序：测定微生物的大小 • 目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后， 转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动 器，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然 后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜 测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每 格长10µm，所以可得： 目镜测微尺每格长度（ µm）=（镜台测微尺格数×10）/目镜 测微尺格数 注意：校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的 接物镜、接目镜、镜筒长度等）进行，而且只能在这特定的情 况下才可重复使用。 • 菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物 台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽

实验程序:测定微生物数量 方法:活菌计数法——平板菌落计数法;总菌计数法——一血 球计数板或霍瑟( Peroff hausser)细菌计数板(二者原 理和部件相同,只是厚薄不同而已)。 1/400mm21/25mm2 昢卌 400 图5-2血球计数板构造 上删卌 上:俯视图(中间平台分为两半,各刻有一个方格网) 面:面围 下:侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为01mm的 间隙 图5-3计数网的分区和分格

实验程序 ：测定微生物数量 • 方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血 球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原 理和部件相同，只是厚薄不同而已）

实验程序测定微生物数量 本实验用血球计数板计数酵母菌的数量 1取清洁无油的血球计数板,在计数室上面加 盖玻片。 2取酵母菌液,摇匀,用滴管由盖玻片边缘滴 小滴,使菌液自行渗入,计数室内不得有气泡。 3.静止5min后,用低倍镜观察并将计数室移至 视野中央。 4.在高倍镜下计数:随机计数五个中格的平均 值,然后求得每个中格的平均值。乘上16(或 25)就得出一大格中的总菌数,最后再换算到每 mnL菌液中的含菌数

实验程序:测定微生物数量 • 本实验用血球计数板计数酵母菌的数量 1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加 盖玻片。 2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一 小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 3. 静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至 视野中央。 4. 在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均 值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或 25）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每 mL菌液中的含菌数

实验程序 5计算方法: 酵母菌细胞数/mL (X1+X2+X3+X4+x5x25(或16)X10X1000稀释倍数 6注意事项:压在方格线上的菌体,以压在底线和 右侧线上的菌体计入本格内;遇到有芽体的酵母 时,若芽体和母体同等大,就按单个酵母计数。 7.计数完毕后,血球计数板要立即清洗干净,并用 吸水纸吸干,最后用擦镜纸擦干净,并放回盒内

实 验程序 5. 计算方法： 6. 注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和 右侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母 时，若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。 7. 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用 吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。 （X1+X2+X3+X4+X5） 5 酵母菌细胞数/mL= X 25（或16）X 10 X 1000 x 稀释倍数

思考题 为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校正? 在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺 点?

思考题 • 为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校正？ • 在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺 点？