南京农业大学：《食品微生物学》课程教学课件（讲稿）实验五 微生物培养基的配制和灭菌

实验五微生物培养基 的配制和灭菌 目的要求 实验材料 实验程序

实验五 微生物培养基 的配制和灭菌 •目的要求 •实验材料 •实验程序

目的要求 了解培养基(普通营养琼脂、乳糖胆盐发 酵管等)的配制原理和方法,掌握其配制 过程。 了解几种灭菌方法,掌握干热灭菌法和 加压燕汽灭菌法的原理及其使用方法。 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工 作及操作方法

目的要求 • 了解培养基(普通营养琼脂、乳糖胆盐发 酵管等)的配制原理和方法，掌握其配制 过程。 • 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和 加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 • 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工 作及操作方法

实验材料 药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蛋白胨、 乳糖、胆盐、溴钾酚紫等。 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱。 其它:天平、牛角匙、电炉、1 N Naoh、pH试 纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带 玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空 试管、培养皿、吸管、各种包装纸、防水纸、绳 索、棉花、标签等

实验材料 • 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蛋白胨、 乳糖、胆盐、溴钾酚紫等 。 • 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱。 • 其它：天平、牛角匙、电炉、1N NaOH、pH试 纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带 玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空 试管、培养皿、吸管、各种包装纸、防水纸、绳 索、棉花、标签等

实验程序 培养基的配制 分离培养微生物常用器皿的准备 培养基和玻璃器材的灭菌方法

实 验 程 序 • 培养基的配制 • 分离培养微生物常用器皿的准备 • 培养基和玻璃器材的灭菌方法

培养基的配制 培养基的种类 培养基的配制方法和步骤 三种培养基的配方及配制 无菌水的制备

培 养 基 的 配 制 • 培养基的种类 • 培养基的配制方法和步骤 • 三种培养基的配方及配制 • 无菌水的制备

培养基的种类 据组成成分可分为: 1合成培养基:由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2半合成培养基:有一部分纯化学物质和另一部分天然物 质配制而成。 3天然培养基:利用天然来源的有机物配制而成。 从培养基的物理状态可分为 1液体培养基:不加凝固剂的液体状态培养基。 2固体培养基:在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固 体状态的培养基或农副产品培养基。 3半固体培养基:在液体培养基中加入0205%凝固剂而 成的半固体状培养基

培养基的种类 • 据组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物 质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。 • 从培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固 体状态的培养基或农副产品培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而 成的半固体状培养基

培养基的种类 常用凝固剂为琼脂(其次为明胶),又叫洋菜、冻粉。 表6-1琼脂与明胶特性比较 比较项目 琼脂 明胶比较项日 琼脂 明胶 熔点(℃) 96 微生物可利用性绝大多数微生物都分微生物 凝固点(℃) 40 0 不能水解利用能水解利用 酸碱度 微酸 酸性耐热性 弱 灰分(%) 140-15.0|来源 植物 动物 氧化钙(%) 1. 15 00化学本质多糖 蛋白质 氧化镁(%) 0,77 00常用浓度()|15-2 5-12 氮(%) 0,40 18.3

培养基的种类 常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉

培养基的配制方法和步骤 称量:按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 溶化:在搪瓷杯中加入所需水量,玻棒搅匀,加热溶 解。 调pH值:用 IN Naoh或ⅠNHC调p,用pH试纸对 照。 加琼脂溶化:加热过程中要不断搅拌,可适当补水。 伴半固体: 1/3 液体分装试管414 分装:注意不要污染棉塞 三角烧瓶<1/2 固体分装试管<1/5 三角烧瓶<12

培养基的配制方法和步骤 • 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 • 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶 解。 • 调pH值：用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对 照。 • 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 半固体： 1/3 液体分装 试管 <1/4 • 分装：注意不要污染棉塞 三角烧瓶 <1/2 固体分装 试管 <1/5 三角烧瓶 <1/2

培养基的配制方法和步骤 分装 加塞 图6-1鼾面的摇法和冷嫩 图6-2培养基的分装

培养基的配制方法和步骤 • 分装 • 加塞

培养基的配制方法和步骤 包扎、标记:包扎成捆,标签,注明何种培养基。 灭菌:牛肉膏蛋白胨培养基 伊红美兰培养基 121C,15min 生理盐水 乳糖胆盐发酵管 115C, 15min 搁置斜面:<12 无菌检查:培养基灭菌后必须在37C下恒温培养 24~48h,确定无菌生长,方可使用

培养基的配制方法和步骤 • 包扎、标记：包扎成捆，标签，注明何种培养基。 • 灭菌：牛肉膏蛋白胨培养基 伊红美兰培养基 1210C，15min 生理盐水 乳糖胆盐发酵管 1150C，15min • 搁置斜面: <1/2 • 无菌检查：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养 24~48h，确定无菌生长，方可使用