上海中医药大学：《实验中医学》课程教学资源（PPT课件讲稿）组织学方法及其在中医研究中的应用

第六章第二节 组织学方法及其 在中医研究中的应用

第六章 第二节 组织学方法及其 在中医研究中的应用

作者和所在科室介绍。 该节引言部分的3段文字，简要谈了作者长期从事中 西医结合基础研究的一些感想。请大家仔细阅读和体会

作者和所在科室介绍。 该节引言部分的3段文字，简要谈了作者长期从事中 西医结合基础研究的一些感想。请大家仔细阅读和体会

一、组织学的主要研究方法 组织学是研究机体微细结构及其相关功能的科学 组织学是应用多种实验技术和染色方法以及各种显 微镜对机体细胞、组织和器官的微细结构及其功能之间 的关系进行深入的研究。 组织大致可分为两大部分，即基本组织和器官系统 。机体是由细胞和细胞间质组成，细胞是组成机体的基 本结构和功能单位，众多细胞由细胞间质粘合在一起， 构成一个细胞群体，称为组织。几种组织相互有机结合 组成器官与系统。 组织学研究方法很多，这里仅就最常用和最基本的 一些方法作简单介绍

一、组织学的主要研究方法 组织学是研究机体微细结构及其相关功能的科学。 组织学是应用多种实验技术和染色方法以及各种显 微镜对机体细胞、组织和器官的微细结构及其功能之间 的关系进行深入的研究。 组织大致可分为两大部分，即基本组织和器官系统 。机体是由细胞和细胞间质组成，细胞是组成机体的基 本结构和功能单位，众多细胞由细胞间质粘合在一起， 构成一个细胞群体，称为组织。几种组织相互有机结合 组成器官与系统。 组织学研究方法很多，这里仅就最常用和最基本的 一些方法作简单介绍

(一)常用光镜标本制备技术 石蜡切片切片标本的制备。该技术最传统、可靠、 实验成本低，使用最广泛。 以往教学实验遇到的问题：取材（不一致、损伤组 织、不熟练导致的过慢)、固定（组织过大、密度不同 )、脱水（不彻底）、包埋（介绍组胚教研室的经验） 、切片（脆产生的原因、厚薄的要求）、染色（漂片、 折叠)、封固（必要性）。 1.取材与固定。将所要观察的人体或动物的新鲜材 料切成适当的小块，立即浸入固定液（常用的是 Bouin's液)中进行固定，防止离体后结构发生腐败降 解变化，使其尽可能保持活体时的结构状态。修块：通 常为3mm见方（绿豆大小），以便乙醇、二甲苯、石蜡置 换

（一）常用光镜标本制备技术 石蜡切片切片标本的制备。该技术最传统、可靠、 实验成本低，使用最广泛。 以往教学实验遇到的问题：取材（不一致、损伤组 织、不熟练导致的过慢）、固定（组织过大、密度不同 ）、脱水（不彻底）、包埋（介绍组胚教研室的经验） 、切片（脆产生的原因、厚薄的要求）、染色（漂片、 折叠）、封固（必要性）。 1．取材与固定。将所要观察的人体或动物的新鲜材 料切成适当的小块，立即浸入固定液（常用的是 Bouin ’ s液）中进行固定，防止离体后结构发生腐败降 解变化，使其尽可能保持活体时的结构状态。修块：通 常为3mm见方（绿豆大小），以便乙醇、二甲苯、石蜡置 换

Bouin液 饱和苦味酸水溶液 75ml 甲醛水溶液(40%) 25ml 冰醋酸 5ml 即：冰醋酸：甲醛水溶液： 饱和苦味酸=1：5：15 上图： 不同被固定 的组织 下图： 修块

Bouin液 饱和苦味酸水溶液 75ml 甲醛水溶液（40％） 25ml 冰醋酸 5ml 即： 冰醋酸：甲醛水溶液： 饱和苦味酸＝1：5：15 上图： 不同被固定 的组织 下图： 修块

2.脱水与包埋。为了使石蜡能浸入组织内，把固定 好的材料用乙醇等脱水，通常为75%、85%、95%、100%、 100%各30分钟-1小时，再经二甲苯透明（二甲苯与乙醇 各50%、100%、100%二甲苯，以透明为度，约30分钟)后 再浸入加温溶化的石蜡中（通常为60℃，2小时)浸透 包埋，使组织块变硬。大体流程如下： 75%乙醇过夜 85%乙醇1h 95%乙醇1h 100%乙醇30min 100%乙醇30min 100%乙醇30min

2．脱水与包埋。为了使石蜡能浸入组织内，把固定 好的材料用乙醇等脱水，通常为75%、85%、95%、100%、 100%各30分钟-1小时，再经二甲苯透明（二甲苯与乙醇 各50%、100%、100%二甲苯，以透明为度，约30分钟）后 ，再浸入加温溶化的石蜡中（通常为60℃，2小时）浸透 ，包埋，使组织块变硬。大体流程如下： 75%乙醇过夜 85%乙醇1h 95%乙醇1h 100%乙醇30min 100%乙醇30min 100%乙醇30min

二甲苯/100%乙醇30min 二甲苯20min 二甲苯10min 浸蜡60C2h 做几个小的盛装蜡液的小盒，将蜡液注入，浸蜡中 取组织块，放置好，等待石蜡自然冷凝，即包埋好。 回回 自动浸蜡机 包埋机

二甲苯/100%乙醇30min 二甲苯20min 二甲苯10min 浸蜡60℃ 2h 做几个小的盛装蜡液的小盒，将蜡液注入，浸蜡中 取组织块，放置好，等待石蜡自然冷凝，即包埋好。 自动浸蜡机 包埋机

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上图： 位于通风橱中的不同 梯度乙醇和染液 下图： 通风橱

3.切片与染色。将包埋的组织蜡块修整：前面接近 组织，四周留距组织2-4mm的石蜡。成正方形，或梯形（ 上面小，下面大)，固定于石蜡切片机上，切成5-10μm 左右的薄片（通常为6μm厚；部分连续切片，且细胞大 而疏的，可以10μm;而细胞小而密的，建议5μm),软 毛笔从蜡片带背面轻轻托起，置于50℃水浴中，待蜡片 展平（展片，石蜡切片下来，通常蜷曲），眼科镊在蜡 片两片交界处轻轻分离，用涂蛋青甘油载玻片伸入片下 ,将之从水面带至玻片上，吸去多余水分，放在栽玻架 上，在恒温箱中烘干。通常37℃烤片24h。脱蜡后进行染 色。最常用的染色法是苏木精和伊红染色，简称HE染色

3．切片与染色。将包埋的组织蜡块修整：前面接近 组织，四周留距组织2-4mm的石蜡。成正方形，或梯形（ 上面小，下面大），固定于石蜡切片机上，切成5-10μm 左右的薄片（通常为6μm厚；部分连续切片，且细胞大 而疏的，可以10μm；而细胞小而密的，建议5μm），软 毛笔从蜡片带背面轻轻托起，置于50℃水浴中，待蜡片 展平（展片，石蜡切片下来，通常蜷曲），眼科镊在蜡 片两片交界处轻轻分离，用涂蛋青甘油载玻片伸入片下 ，将之从水面带至玻片上，吸去多余水分，放在栽玻架 上，在恒温箱中烘干。通常37℃烤片24h。脱蜡后进行染 色。最常用的染色法是苏木精和伊红染色，简称HE染色 ：

Otewu 切片机 切片机和摊片设备

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