山东理工大学：《蛋白质与酶工程》课程教学课件（讲稿）第四章  酶的提取与分离纯化（2/2）

第三节酶的分离纯化（第六节 层析分离）)不知道大家有没有这样的经历，在用黑墨水写字的时候不小心把水弄到纸上，大家还记得纸变成什么样子了吗？

第三节 酶的分离纯化（第六节 层析分离） 不知道大家有没有这样的经历，在用黑墨水写字的时候不小心 把水弄到纸上，大家还记得纸变成什么样子了吗？

P大家看到的就是纸层析法，是最简单的层析方法，纸层析属于分配层析。p层析指的是把几种物质的混合物，利用媒介，把它们各自分离p层析有很多种，但都是由移动相和固定相构成

p 大家看到的就是纸层析法，是最简单的层析方法，纸层析属于 分配层析。 p 层析指的是把几种物质的混合物，利用媒介，把它们各自分离。 p 层析有很多种，但都是由移动相和固定相构成

层析分离。层析分离的定义：利用混合物中各组分的物理化学性质（分子大小和形状，分子极性，吸附力，亲和力等）的不同，使各组分在两相中的分布程度不同，其中一个相为固定的（称为固定相），另一个相则流过此固定相（称为流动相）并使各组分以不同速度移动，从而达到分离

层析分离的定义： 利用混合物中各组分的物理化学性质（分子大小和形状，分子极 性，吸附力，亲和力等）的不同，使各组分在两相中的分布程度 不同，其中一个相为固定的(称为固定相)，另一个相则流过此固 定相(称为流动相)并使各组分以不同速度移动，从而达到分离。 层析分离

层析分离。层析分离的种类：常用的有分配层析、吸附层析、离子交换层析、凝胶层析和亲和层析等

层析分离的种类： 常用的有分配层析、吸附层析、离子交换层析、凝胶层析和亲和 层析等。 层析分离

层析分离?各种层析方法及其原理：1）分配层析（熟悉）定义：利用各组分在两相中的分配系数不同，而使各组分分离的层析方法。固定相：极性溶剂（例如水、甲醇），能和多孔的支持物（惰性物质如淀粉、滤纸）紧密结合，使呈不流动状态。流动相：非极性的有机溶剂。分配层析主要有纸上层析、薄层层析等方法

各种层析方法及其原理： 1）分配层析（熟悉） 定义：利用各组分在两相中的分配系数不同，而使各组分分离 的层析方法。 固定相：极性溶剂（例如水、甲醇），能和多孔的支持物(惰性物 质如淀粉、滤纸)紧密结合，使呈不流动状态。 流动相：非极性的有机溶剂。 分配层析主要有纸上层析、薄层层析等方法。 层析分离

常用落剂的极性顺序：水(极性最大)>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>正了醇>醋酸乙酯>乙醚>氟伤>苯>甲苯>环己烷>己烷>庾烷煤油（极性最小）

常用溶剂的极性顺序:  水(极性最大) > 甲醇 > 乙醇 > 丙醇 > 丙酮 >  正丁醇 > 醋酸乙酯 > 乙醚  > 氯仿 >  苯 > 甲 苯 > 环己烷 > 己烷 > 庚烷 > 煤油(极性最小)

分配层析画图说明（纸层析为例）口 纸上层析是以滤纸纤维的结合水为固定相，以与水不相混洛或部分混洛的有机溶剂为流动相。①若混合物（图中绿点）由两种物质组成，展开时，有机络剂在滤纸上流动，其中一种物质（蓝点）由于更洛于纸上复延的洛剂，所以移动更快；另外一种物质（黄点）由于更洛于纸上的结合水，所以移动较慢，足够时向等待后，两种物质分开。口 缺点：展开时向长、分离量小，不适用于业化分离，而且作为流动相的有机洛剂可能引起酶的失活

Ø 纸上层析是以滤纸纤维的结合水为固定相，以与水不相混溶或部分 混溶的有机溶剂为流动相。 Ø 若混合物（图中绿点）由两种物质组成，展开时，有机溶剂在滤纸 上流动，其中一种物质（蓝点）由于更溶于纸上蔓延的溶剂，所以 移动更快；另外一种物质（黄点）由于更溶于纸上的结合水，所以 移动较慢，足够时间等待后，两种物质分开。 Ø 缺点：展开时间长、分离量小，不适用于工业化分离，而且作为流 动相的有机溶剂可能引起酶的失活。 分配层析画图说明（纸层析为例）

① 分配层析还有体层层析方法。① 体层层析和纸层析的不同之处就是固定相不是纸，而用的是截破片，表面加了一层硅胶。在有机实验室中这种器材很好用。apluLTLC

Ø 分配层析还有薄层层析方法。 Ø 薄层层析和纸层析的不同之处就是固定相不是纸，而用的 是载玻片，表面加了一层硅胶。在有机实验室中这种器材 很好用

Next：柱层析就是有一个仪器：其中装入某种物质，倒入溶剂让混合物是一直向下流

Next: 柱层析 就是有一个仪器：其中装 入某种物质，倒入溶剂， 让混合物是一直向下流

层析分离层析方法分离依据吸附层析利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使混合物中各组分分离离子交换层利用离子交换剂上的可解离基团（活性基团析对各种离子的亲和力不同而达到分离自的凝胶层析以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的相对分子质量不同而达到物质分离亲和层析利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力，使生物分子分离纯化

层析方法 分离依据 吸附层析 利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使混 合物中各组分分离 离子交换层 析 利用离子交换剂上的可解离基团（活性基团） 对各种离子的亲和力不同而达到分离目的 凝胶层析 以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所 含各种组分的相对分子质量不同而达到物质 分离 亲和层析 利用生物分子与配基之间所具有的专一而又 可逆的亲和力，使生物分子分离纯化 层析分离