山东理工大学：《蛋白质与酶工程》课程教学课件（讲稿）第四章  酶的提取与分离纯化（1/2）

第四章陈的提取与分离 纯化 主：陈洁 生命科学营院 植物逆境实路室

第四章  酶的提取与分离 纯化 主讲: 陈洁 生命科学学院 植物逆境实验室

第四章：主要琳授内容 预处理 提取 分离纯化 浓缩、干燥、结晶

1 预处理 提取 2 3 分离纯化 第四章：主要讲授内容 浓缩、干燥、结晶 4

第四幸 酶的分离工程 酶的提取和分离纯化：将酶从细胞或培养基中抽提出来 ，获得与使用目的相适应的有一定纯度和浓度的酶产品的 过程。 。理想的提取和分离纯化方法是在提高酶的比活的同时， 要求酶回收率高，提取步骤少、工艺简单，成本低

第四章 酶的分离工程 酶的提取和分离纯化：将酶从细胞或培养基中抽提出来 ，获得与使用目的相适应的有一定纯度和浓度的酶产品的 过程。 理想的提取和分离纯化方法是在提高酶的比活的同时， 要求酶回收率高，提取步骤少、工艺简单，成本低

陈提取和分离纯化技术路孩 细胞破碎 动物、植物或微生物细胞 酶提取 发酵液 酶分离纯化 酶浓缩 离心分离，过滤分离，沉 酶贮存 淀分离，层析分离，电泳 分离，萃取分离，结晶分 离等

酶提取和分离纯化技术路线 细胞破碎 酶提取 酶分离纯化 酶浓缩 酶贮存 动物、植物或微生物细胞 发酵液 离心分离，过滤分离，沉 淀分离，层析分离，电泳 分离，萃取分离，结晶分 离等

第一节预处理 发酵液的预处理：加热；凝聚 絮凝（聚丙烯酰胺）；助滤剂（硅藻，珍珠 粉木浆) 。加热：减少粘度，蛋白质变性（沉淀）： 。凝聚：凝聚剂（电解质）； 。絮凝：利用高分子絮凝剂（聚丙烯酰胺）来制 造絮凝体，速度快，用量少效果好，也可以凝聚 剂和絮凝剂一起预处理。 。助滤剂：硅藻土，珍珠岩，木浆，淀粉

第一节 预处理 发酵液的预处理：加热；凝聚 ；絮凝（聚丙烯酰胺）；助滤剂（硅藻，珍珠 粉，木浆） 加热：减少粘度，蛋白质变性(沉淀）； 凝聚：凝聚剂（电解质）； 絮凝：利用高分子絮凝剂（聚丙烯酰胺）来制 造絮凝体，速度快，用量少效果好，也可以凝聚 剂和絮凝剂一起预处理。 助滤剂：硅藻土，珍珠岩，木浆，淀粉

第一节预处理 。细胞破坏：破坏细胞的外壳（细胞壁、细胞膜） 。目的：动植物组织的酶，微生物胞内酶 很多基因工程产物如干扰素，胰岛素，生长激素 等也是胞内物质

第一节 预处理 细胞破坏：破坏细胞的外壳（细胞壁、细胞膜） 目的：动植物组织的酶，微生物胞内酶 很多基因工程产物如干扰素，胰岛素，生长激素 等也是胞内物质

第一节预处理 a.压缩/撞击破碎 b.剪切破碎 c.化学渗透 细胞破碎机理

第一节 预处理

第一节预处理（阳胞玻碎方法及典原理 捣碎法 机械破碎 通过机械运动产生的剪切 力，使组织、细胞破碎。 研磨法 匀浆法 通过各种物理因素的作用， 温度差破碎法 物理破碎 使组织、细胞的外层结构破 压力差破碎法 坏，而使细胞破碎。 超声波破碎法 有机溶剂： 化学破碎 通过各种化学试剂对细胞 膜的作用，而使细胞破碎 甲苯、丙酮 丁醇、氯仿 表面活性剂： Triton、 通过细胞本身的酶系或外 ween 加酶制剂的催化作用，使 酶促破碎 自溶法 细胞外层结构受到破坏， 外加酶制剂法 而达到细胞破碎

机械破碎 捣碎法 研磨法 匀浆法 物理破碎 温度差破碎法 压力差破碎法 超声波破碎法 化学破碎 有机溶剂： 甲苯、丙酮 丁醇、氯仿 表面活性剂： Triton、 Tween 酶促破碎 自溶法 外加酶制剂法 通过机械运动产生的剪切 力，使组织、细胞破碎。 通过各种物理因素的作用， 使组织、细胞的外层结构破 坏，而使细胞破碎。 通过各种化学试剂对细胞 膜的作用，而使细胞破碎 通过细胞本身的酶系或外 加酶制剂的催化作用，使 细胞外层结构受到破坏， 而达到细胞破碎 第一节 预处理（细胞破碎方法及其原理）

细胞破碎方法及其原理 通过机械运动产生的压缩 捣碎法 机械破碎 力，剪切力，使组织、细 研磨法 胞破碎。 匀浆法 ① 机械捣碎法：动植物组织 ② 研磨法：球磨机（适用于绝大多数微生物细胞破碎， 但有效能量利用率仅为1%，影响破碎率的参数较多) ③匀浆法：高压匀浆 细胞悬浮液在高压作用喷出，撞击到碰撞环上，细胞 在受到高速撞击作用后，急剧释放到低压环境，从而 在撞击力和剪切力等综合作用下破碎。（操作压力通 常为50~70MPa,适用于酵母和大多数细菌细胞的破 碎。)

机械破碎 捣碎法 研磨法 匀浆法 通过机械运动产生的压缩 力, 剪切力，使组织、细 胞破碎。 细胞破碎方法及其原理 ① 机械捣碎法：动植物组织 ② 研磨法：球磨机（适用于绝大多数微生物细胞破碎， 但有效能量利用率仅为1%，影响破碎率的参数较多） ③ 匀浆法：高压匀浆 细胞悬浮液在高压作用喷出，撞击到碰撞环上，细胞 在受到高速撞击作用后，急剧释放到低压环境，从而 在撞击力和剪切力等综合作用下破碎。（操作压力通 常为50～70MPa，适用于酵母和大多数细菌细胞的破 碎。）

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