四川农业大学：《生物化学》课程教学资源（PPT课件讲稿）第十一章 核酸的酶促降解和核苷酸代谢

第十一章核酸的酶促降解和核苷酸代谢 本章重点讨论核酸酶的类别和特点,对梭 苷酸的生物合成和分解代谢作一般介绍。 第一节核酸的酶促降解 第二节核苷酸的分解代谢 第三节校苷酸的合成代谢

第十一章 核酸的酶促降解和核苷酸代谢 本章重点讨论核酸酶的类别和特点，对核 苷酸的生物合成和分解代谢作一般介绍。 第一节 核酸的酶促降解 第三节 核苷酸的合成代谢 第二节 核苷酸的分解代谢

第一节核酸的酶促降解 核酸酶 核苷酸酶 核苷磷酸化酶 核酸 核苷酸 核苷 碱基十糖-1-P 磷酸 核酸酶 二、限制性内切

第一节 核酸的酶促降解 一、核酸酶 二、限制性内切酶 核酸酶 核苷酸酶 核苷磷酸化酶 核酸 核苷酸 核苷 碱基+戊糖-1-P 磷酸

核酸酶 1、核酸酶的分类 核糖核酸酶( RNase) (1)根据对底物的脱氧核糖核酸酶( DNase) 专一性分为 非特异性核酸酶 核酸内切酶 (2)根据切割位点分为核酸外切酶 2、核酸酶的作用特点

核 酸 酶 1、核酸酶的分类 （1）根据对底物的 专一性分为 （2）根据切割位点分为 核糖核酸酶(RNase) 脱氧核糖核酸酶(DNase) 非特异性核酸酶 核酸内切酶 核酸外切酶 2、核酸酶的作用特点

外切核酸酶对校酸的水解位点 BB BBBB B OH 3 牛脾磷酸二酯酶 蛇毒磷酸二酯酶 (5′端外切5得3) (3′端外切3得5)

外切核酸酶对核酸的水解位点 5´ p p p p OH B p p p p 3´ B B B B B B B 牛脾磷酸二酯酶 （ 5´端外切5得3） 蛇毒磷酸二酯酶 （ 3´端外切3得5）

内切核酸酶对RNA的水解位点示意图 GA C U Q Q Q OH RNAase I RNAase I RNAase T1 RNAase TI Pu:嘌呤 y:嘧啶

内切核酸酶对RNA的水解位点示意图 5´ p p p p OH Py Pu Py Py 1´ p p p G A C U p p p G A 3´ RNAase I RNAase I RNAase T1 RNAase T1 Pu ：嘌呤 Py：嘧啶

限制性内物酶 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基 对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列,并在此序 列的某位点水解DNA双螺旋链,产生粘性末端或平末端,这类 酶称为限制性内切酶( ristriction endonuclease)。 类型 ●命名 意义

限制性内切酶 • 类型 • 命名 • 意义 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基 对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列，并在此序 列的某位点水解DNA双螺旋链，产生粘性末端或平末端，这类 酶称为限制性内切酶（ristriction endonuclease）

常用的DNA限制性内切酶的专一性 酶 辨认的序列和切口 说明 ·AGCT Alu i TCGA· 四核苷酸,平端切口 Bam hi … GGATCO 六核苷酸,粘端切口 CCTAGG… Bgl I AGATCT 六核苷酸,粘端切口 TCTAGA… ECoR I GAATTO· CTTAAG 六核苷酸,粘端切口 HindⅢ AAGCTT。 六核苷酸,粘端切口 TTCGAA.. Sal I …… GTCGAC∴∴ 六核苷酸,粘端切口 ..CAGCTG. Sma i … CCCGGO…… 六核苷酸,平端切口 .GGGCCC

常用的DNA限制性内切酶的专一性 酶 辨认的序列和切口 说明 ‥ ‥A G C T ‥‥ ‥ ‥T C G A ‥ ‥ ‥ ‥G G A T C C ‥‥ ‥ ‥C C T A G G ‥‥ ‥ ‥A G A T C T ‥‥ ‥ ‥T C T A G A ‥‥ ‥ ‥G A A T T C ‥‥ ‥ ‥C T T A A G ‥‥ ‥ ‥A A G C T T‥‥ ‥ ‥T T C G A A ‥‥ ‥ ‥G T C G A C ‥‥ ‥ ‥C A G C T G ‥‥ ‥ ‥C C C G G G ‥‥ ‥ ‥G G G C C C ‥‥ Bam H I Alu I Bgl I Eco R I Hind Ⅲ Sal I Sma I 四核苷酸，平端切口 六核苷酸，平端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口

限制性內酶类型 I型:分子量大于105,多亚基,册S线苷蛋氨酸、ATP 和M 识别点与切割仳点相差甚远,产物为异质,是限 制与修饰相排斥的多功能酶 Ⅱ型:分子量小于105,需Mg2,切割位点位于识别 位点上,产物为专一性片段,不具修饰酶功能。觊在分子生 物学研究所用的限制性内切酶均为此类, ⅡI型:识别位点为57bp的非对称序列,切割位点在 顺序之外离识别序列5-10bp,切割双链,个别也切割单链。 是限制与修伽相多功能酶

限制性内切酶类型 I型：分子量大于105，多亚基，需S-线苷蛋氨酸、ATP 和Mg2+ ，识别位点与切割位点相差甚远，产物为异质，是限 制与修饰相排斥的多功能酶. Ⅱ型：分子量小于105，需Mg2+ ，切割位点位于识别 位点上，产物为专一性片段，不具修饰酶功能。现在分子生 物学研究所用的限制性内切酶均为此类。 ⅡI型：识别位点为5-7bp的非对称序列，切割位点在 顺序之外离识别序列5-10bp，切割双链，个别也切割单链。 是限制与修饰相多功能酶

限制性内切酶的命名和意义 例: ECoRI,这是从大肠杆菌( Ecoli)R菌珠中分离出的一种限制性内切酶 ECoRI 属名种名株名序号 限制性内切酶是分析染色体结构、制作DNA限 制图谱、进行DNA序列测定和基因分离、基因体外 重组等研究中不可缺少的工具,是一把天赐的神刀, 用来解剖纤细的DNA分子

限制性内切酶的命名和意义 Eco R I 属名 种名 株名 序号 例：Eco R I，这是从大肠杆菌（Ecoli）R菌珠中分离出的一种限制性内切酶 限制性内切酶是分析染色体结构、制作DNA限 制图谱、进行DNA序列测定和基因分离、基因体外 重组等研究中不可缺少的工具，是一把天赐的神刀， 用来解剖纤细的DNA分子

第二节核苷酸的降解 核苷酸酶核苷磷酸化酸 核苷酸 核苷 碱基+(脱氧)戊糖-1-P 磷酸 票呤的降解 二、嘧啶的降解

第二节 核苷酸的降解 二、嘧啶的降解 一、嘌呤的降解 核苷酸酶 核苷磷酸化酶 核苷酸 核苷 碱基+（脱氧）戊糖-1-P 磷酸