江南大学：《微生物学》课程教学资源（实验讲义）实验六 酵母菌细胞总数的测定

实验六酵母菌细胞总数的测定 一、目的要求 12 学习并掌捏血球计数板计数的原理 掌握利用血球计数板进行微生物计数的方法 二、实验材料 1.菌种：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)麦芽汁培养液 2.其它：显微镜、血球计数板、手动计数器、擦镜纸、吸水纸等 三、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。该方法是将菌悬 液放在血球计数板与盖玻片之间容积一定的计数室中，在显微镜下进行计数，然后根据计数 结果计算单位体积内的微生物总数目。 血球计数板是一块特制的载玻片，其上由4条棺构成3个平台。中间较宽的平台又被 一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中 间的大方格即为计数室。计数室的边长为1mm,中间平台下陷0.1mm,故盖上盖玻片后计 数室的容积为0.1mm3。血球计数板的构造如下。 Depa m2☒]4因 回d5o 或大后的计数室(25个中整)放大后的中情《16个小蒂」 25X16 。BF 131415816 大后计数室《6个中格》 散大后的中(25个小墙) 方同（分成9个大格。中央大格B为计室 图6-1血球计数板构造 常见血球计数板的计数室有两种规格： 一种是16×25型，即计数室共分为16个中方 格，每个中方格又分为25个小方格：另一种是25×16型，即计数室先被分成25个中方格 每个中方格又分为16个小方格。但无论是哪一种规格的血球计数板，其计数室的小方格都 是400个。我们采用的是25×16型。 出数。通搭数5个中方的藏中成商液的色商数计算公式如下 5X10A·B A为5个中方格中的总菌数，B为稀释倍数 四、操作步骤 1.菌悬液的制备：以无菌生理盐水将酿酒酵母培养物制成浓度适当的菌悬液。 2.加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的酵母菌悬 液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细作用自动进入计数室（注意取样前要

实验六 酵母菌细胞总数的测定 一、目的要求 1. 学习并掌握血球计数板计数的原理； 2. 掌握利用血球计数板进行微生物计数的方法。 二、实验材料 1. 菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）麦芽汁培养液 2. 其它：显微镜、血球计数板、手动计数器、擦镜纸、吸水纸等 三、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。该方法是将菌悬 液放在血球计数板与盖玻片之间容积一定的计数室中，在显微镜下进行计数，然后根据计数 结果计算单位体积内的微生物总数目。 血球计数板是一块特制的载玻片，其上由 4 条槽构成 3 个平台。中间较宽的平台又被 一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为 9 个大方格，中 间的大方格即为计数室。计数室的边长为 1mm，中间平台下陷 0.1mm，故盖上盖玻片后计 数室的容积为 0.1mm3。血球计数板的构造如下。 图 6-1 血球计数板构造 常见血球计数板的计数室有两种规格：一种是 16×25 型，即计数室共分为 16 个中方 格，每个中方格又分为 25 个小方格；另一种是 25×16 型，即计数室先被分成 25 个中方格， 每个中方格又分为 16 个小方格。但无论是哪一种规格的血球计数板，其计数室的小方格都 是 400 个。我们采用的是 25×16 型。 计数时，通常数 5 个中方格的总菌数，再换算成 1ml 菌液中的总菌数。计算公式如下： 1ml 菌液中总菌数＝5×104A·B A 为 5 个中方格中的总菌数，B 为稀释倍数 四、操作步骤 1. 菌悬液的制备：以无菌生理盐水将酿酒酵母培养物制成浓度适当的菌悬液。 2. 加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的酵母菌悬 液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细作用自动进入计数室（注意取样前要摇

匀菌液：加样时计数室不可有气泡产生)。 3.找计数室：加样后静止5mi,然后将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找 到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数（注意调节显微镜光线强弱，使菌体和 数室线条清晰) 4. 显微镜计数：取左上、右上、左下、右下和中央5个中方格进行计数。位于中方格边领 上的茵体一般只计上边和右边线上的（或只计左边和下功线上的）。如遇到酵母出芽， 芽体大小达到母细胞一半以上时，即作为两个菌体计数。计数一个样品要从上下两个计 数室中得到的平均数值来计算样品的 5. 清洗血球计数板：使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水冲洗干净，切勿用硬物洗 刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察计数室内是否有残留菌体或其它沉淀 物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。 五、实验内容 按上述方法及步骤测定所给酿酒酵母培养液的细胞浓度 大、实验报告 将结果记录于下表中。A表示5个中方格中总菌数：B表示稀释倍数 各中方格菌数 二室南数 A B 12 345 平均值ml 第一室 第二室 2。根据你的体会，说说用血球计数板计数的误差主要米自哪些方面？应如何尽量减少误 差，力求准确？ 3 能否用血球计数板在油镜下对细菌进行计数？为什么？

匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生）。 3. 找计数室：加样后静止 5min，然后将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找 到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数（注意调节显微镜光线强弱，使菌体和计 数室线条清晰）。 4. 显微镜计数：取左上、右上、左下、右下和中央 5 个中方格进行计数。位于中方格边线 上的菌体一般只计上边和右边线上的（或只计左边和下边线上的）。如遇到酵母出芽， 芽体大小达到母细胞一半以上时，即作为两个菌体计数。计数一个样品要从上下两个计 数室中得到的平均数值来计算样品的含菌量。 5. 清洗血球计数板：使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水冲洗干净，切勿用硬物洗 刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察计数室内是否有残留菌体或其它沉淀 物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。 五、实验内容 按上述方法及步骤测定所给酿酒酵母培养液的细胞浓度。 六、实验报告 1. 将结果记录于下表中。A 表示 5 个中方格中总菌数；B 表示稀释倍数。 各中方格菌数 A B 二室 平均值 菌数 1 2 3 4 5 /ml 第一室 第二室 2. 根据你的体会，说说用血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误 差，力求准确？ 3. 能否用血球计数板在油镜下对细菌进行计数？为什么？