辽宁农业职业技术学院：《农药残留检测技术》课程教学课件（PPT讲稿）13 酶抑制剂和免疫法.ppt_大学文库

第六章酶抑制法和免疫测定技术学习指南观察思考课外阅读复习自测退出本章本章目录演示文稿辽农职院工程系质检中心 2024年11月1日

◼ 目的要求：生物测定技术以其简单、快速、特异性强、样品量少而得到迅速发展，应用酶抑制技术、酶联免疫技术、生物技术等快速测定农药残留，已成为一定的市场需求，但此类方法仍只能达到定性和半定量的水平。通过本章的学习，目的是使学生掌握酶制技术、酶联免疫技术等常用的快速测定农药残留的方法，了解与免疫法相关的一些知识。 ◼ 学习要点 1、一般了解：农药残留生物检测技术的问题和展望。 2、一般掌握：生物传感器在农药残留检测中的应用。 3、重点掌握：酶抑制技术；酶联免疫技术；生物技术等快速测定农药残留方法等

第六章酶抑制法和免疫测定技术本节首页退出本章一、酶抑制分析测定法 1、酶法概述 2、酶法检验原理 3、酶原 4、底物与显色剂 5、测定方法二、免疫检测技术 1、免疫反应 2、免疫分析 3、酶联免疫吸附测定法 4、农药抗体制备 5、ELISA法的特点

本节首页退出本章一、酶抑制分析测定法 1、酶法概述

本节首页退出本章真性胆碱酯酶与胆碱能神经的生理功能极为密切。其生理功能是，当神经冲动到达胆碱能神经末梢时，突触小泡内的Ach外排至突触间隙，作用于突触后膜的胆碱能受体，引起下一级神经元或效应器的激发。在正常生理条件下，Ach完成传递冲动作用后，随即被突触后膜上的AchE在数毫秒内水解，生成乙酸和胆碱。 2、酶法检验原理

本节首页退出本章神经性毒剂分子中含有亲电子的正磷原子(Pδ+)，它与Ach分子中的正碳原子(Cδ+)同样具有亲电子性质。但神经性毒剂的亲电子能力此Ach强，这是因为毒剂分子中，P＝O和P-F键上的O、F原子相对电负性比P原子大得多(相对电负性P＝2.1，O＝3.5，F＝4.0，C&S＝ 2.5)。因此，相对电负性大的O、F原子吸收电子成为负极，使P成为低电子密度的正极，即P原子带有较多的正电荷和更强的亲电子能力。所以神经性毒剂对 AchE有更大的亲和力和抑制力。 (1)神经性毒剂对AchE的抑制机理

本节首页退出本章胆碱酯酶根据其水解基质的专一性和速度不同分真性胆碱酯酶和假性胆碱酯酶，前者又称乙酰胆碱酯酶(AchE)，后者包括丁酰胆碱酯酶(BuchE)和丙酰胆碱酯酶 (PrchE)。假阳性：水果、蔬菜的提取物中含有对有抑制作用的杂质，如氯代烟碱类物质。 (2)对胆碱酯酶的抑制作用 ① 假阳性

本节首页退出本章乙酰胆碱敌敌畏 P CCl 2 OCH CH3 O CH3 O O AchE ② 产生假阳性的作用机理

3、酶原本节首页退出本章蜜蜂头的脑酯酶液条件：3日龄，-20℃ 0.24g/ml磷酸缓冲液（pH7.5）保质期：3个月

4、底物与显色剂本节首页退出本章乙酰胆碱+H2O→胆碱+乙酸 pH为6.2（黄） →7.6（蓝色）（1）乙酰胆碱-溴百里酚蓝