复旦大学：《细胞与医学遗传学实验》教学课件_遗传病的分析——培养细胞的染色体制备

遗传病的分析3 培养细胞的染色体制备

遗传病的分析3 培养细胞的染色体制备

定义 在细胞的生长周期中,中期染色体的长 短、大小、恒定性正适合我们对其进行 分析、研究。 因此利用人工的方法,使大部分分裂细 胞处于中期而不向后期转化,并获得之, 经处理,制片后观察分析

定 义 ◼ 在细胞的生长周期中，中期染色体的长 短、大小、恒定性正适合我们对其进行 分析、研究。 ◼ 因此利用人工的方法，使大部分分裂细 胞处于中期而不向后期转化，并获得之， 经处理，制片后观察分析

器材 细胞株 ■普通光学显微镜 ■冰载玻片 ■酒精灯

器 材 ◼ 细胞株 ◼ 普通光学显微镜 ◼ 冰载玻片 ◼ 酒精灯

试剂 0.25%胰旦白酶液 0.075M KCL 秋水仙素 ■固定液(冰醋酸/甲醇1:3) Giemsa染液

试 剂 ◼ 0.25%胰旦白酶液 ◼ 0.075M KCL ◼ 秋水仙素 ◼ 固定液（冰醋酸/甲醇 1:3） ◼ Giemsa染液

士操作 1.收集细胞前6h,培养细胞中加5ug/ml秋水仙 素2滴,混匀后继续培养 2.0.25%胰旦白酶液消化细胞,并收集细胞于 离心管中 3.离心1800转/min×10min,弃上清,取沉淀 4.加0.075MKCL低渗液4ml,充分打匀细胞,室 温静置20min 5.再加入固定液1ml,并与原有的低渗液充分混 匀,室温静置5min 6.离心,弃上清,取沉淀

操 作 1. 收集细胞前6h，培养细胞中加5ug/ml秋水仙 素2滴，混匀后继续培养 2. 0.25%胰旦白酶液消化细胞，并收集细胞于 离心管中 3. 离心1800转/min×10min，弃上清，取沉淀 4. 加0.075M KCL低渗液4ml，充分打匀细胞，室 温静置20min 5. 再加入固定液1ml，并与原有的低渗液充分混 匀，室温静置5min 6. 离心，弃上清，取沉淀

操作 7.加固定液5m,轻轻打匀,室温静置 30min 8.离心,弃上清,取沉淀 9.加少量固定液,制成染色体悬液 10.取1-2滴染色体悬液,滴加在冰玻片上, 迅速吹片,酒精灯下烤干玻片 11.Gⅰemsa染色5min,自来水冲洗,待干 后,显微镜下观察

操 作 7. 加固定液5ml，轻轻打匀，室温静置 30min 8. 离心，弃上清，取沉淀 9. 加少量固定液，制成染色体悬液 10. 取1-2滴染色体悬液，滴加在冰玻片上， 迅速吹片，酒精灯下烤干玻片 11. Giemsa染色5min，自来水冲洗，待干 后，显微镜下观察

光镜100倍下人染色体G带照片

光镜100倍下人染色体G带照片

注意 浓度与时间秋水仙素、低渗 临用时新鲜配制固定液、染液 固定液的比例 制片和染色

注 意 ◼ 浓度与时间 秋水仙素、低渗 ◼ 临用时新鲜配制 固定液、染液 ◼ 固定液的比例 ◼ 制片和染色