复旦大学：《细胞与医学遗传学实验》教学课件_细胞实验（二）细胞损伤与保护

细胞实验(二) 细胞损伤与保护2 设3组不同的细胞组 正常、损伤、损伤恢复 ·用不同的实验方法检测、验证实验结果

细胞实验（二） 细胞损伤与保护2 • 设3组不同的细胞组 正常、损伤、损伤恢复 • 用不同的实验方法检测、验证实验结果

实验内容 细胞电子显微銳捡物 ·细胞活率测定 匹细胞结构的分高与鉴定

实验内容 • 细胞电子显微镜检测 • 细胞活率测定 • 亚细胞结构的分离与鉴定

实验设计 1.(电镜)每班传细胞入含小盖片培养瓶6瓶(2组) 2瓶正常、4瓶损伤、第二天2瓶损伤后恢复 2.(活率)每组传细胞入96孔培养板9孔 3孔正常、6孔损伤、第二天3孔损伤后恢复 3.(分离)每班传代细胞8瓶 4瓶细胞1传2至25m培养瓶成8瓶细胞

实验设计 1. （电镜）每班传细胞入含小盖片培养瓶6瓶（ 2组） 2瓶正常、4瓶损伤、第二天2瓶损伤后恢复 2. （活率）每组传细胞入96孔培养板9孔 3孔正常、6孔损伤、第二天3孔损伤后恢复 3. （分离）每班传代细胞8瓶 4瓶细胞1传2至25ml培养瓶成8瓶细胞

细胞电子显微銳捡物 细胞电镜标本制备

细胞电子显微镜检测 细胞电镜标本制备

原理 光学显微镜无法看清小于0.2um的细 微结构,我们把这些细微结构称为亚显 微结构( submicroscopic structures) 或超微结构( ultramicroscopic structures; ultrastructures)。要看 清这些结构,就必须选择波长更短的光 源,以提高显微镜的分辨率

原 理 光学显微镜无法看清小于0.2um的细 微结构，我们把这些细微结构称为亚显 微结构（submicroscopic structures） 或超微结构（ultramicroscopic structures；ultrastructures）。要看 清这些结构，就必须选择波长更短的光 源，以提高显微镜的分辨率

电子显微镜与光学显微镜 的结构,从原理上来说是相似 的,但也有不同之处

电子显微镜与光学显微镜 的结构，从原理上来说是相似 的，但也有不同之处

首先不同的是用电子束(电子流)代替照明光 源 其次,电镜使用的是电子透镜,而不是光学透 镜,电子透镜不是肉眼可见的物质透镜,它是 由磁或电所形成的磁场或电场的局部空间来起 到透镜的作用 第三个区别是成像原理不同。其成像是由于标 本中不同结构中原子与电子发生碰撞后,造成 电子散射角度不同,使荧光屏上的电子强度也 相应不同

• 首先不同的是用电子束（电子流）代替照明光 源。 • 其次，电镜使用的是电子透镜，而不是光学透 镜，电子透镜不是肉眼可见的物质透镜，它是 由磁或电所形成的磁场或电场的局部空间来起 到透镜的作用。 • 第三个区别是成像原理不同。其成像是由于标 本中不同结构中原子与电子发生碰撞后，造成 电子散射角度不同，使荧光屏上的电子强度也 相应不同

电镜制样技术 由于电子束的穿透能力有限,为了获得较 髙分辨率,需要使用超薄切片机制成厚度一般 仅为40~50m的超薄切片。这就需要样品有 定的刚性和韧性,为此,样品需要包埋在特 殊的介质中。但包埋的过程会破坏样品的结构, 因此超薄切片样品制备的第一步就是固定,其 后依次是包埋、切片和染色

电镜制样技术 由于电子束的穿透能力有限，为了获得较 高分辨率，需要使用超薄切片机制成厚度一般 仅为40～50nm的超薄切片。这就需要样品有 一定的刚性和韧性，为此，样品需要包埋在特 殊的介质中。但包埋的过程会破坏样品的结构， 因此超薄切片样品制备的第一步就是固定，其 后依次是包埋、切片和染色

超薄切片的制备 1、固定:戊二醛和(OsO4)等,锇酸后固定。 2、包埋:环氧树脂和丙烯酸树脂等 3、切片:玻璃刀用超薄切片机切片, 厚度40~50nm,切片收集在 铜网或镍网上,在电镜下观察。 4、染色:常用的染色液是醋酸双氧铀(易 染核酸)和铅盐(易染蛋白质)

超薄切片的制备 1、固定：戊二醛和（OsO4）等， 锇酸后固定。 2、包埋：环氧树脂和丙烯酸树脂等。 3、切片：玻璃刀用超薄切片机切片， 厚度40～50nm，切片收集在 铜网或镍网上，在电镜下观察。 4、染色：常用的染色液是醋酸双氧铀（易 染核 酸）和铅盐（易染蛋白质）

结果 在电子显微镜下观察 比对正常、损伤及损伤后恢复标本 照相 分析 总结

结 果 • 在电子显微镜下观察 比对正常、损伤及损伤后恢复标本 • 照相 • 分析 • 总结