复旦大学：《细胞与医学遗传学实验》教学课件_实验（四）遗传病的分析——细胞内微核的检测（系谱分析）

实验(四) 遗传病的分析2 细胞内微核的检测 系谱分析

实验（四） 遗传病的分析2 细胞内微核的检测 系谱分析

细胞内微核的检测

细胞内微核的检测

原理 环境中有害物质可导致细胞中染色 体或纺锤体的损伤,产生的染色单体或 无着丝粒染色体片断在细胞分裂末期滞 留于子细胞胞质中,形成微核

原 理 环境中有害物质可导致细胞中染色 体或纺锤体的损伤，产生的染色单体或 无着丝粒染色体片断在细胞分裂末期滞 留于子细胞胞质中，形成微核

原理 本实验选用培养细胞,用环磷酰胺作 诱导剂(射线、顺铂等),促使细胞中 染色体断裂,产生微核。 微核经 giemsa染色后呈紫红色,胞 质被染成淡灰蓝色

原 理 本实验选用培养细胞，用环磷酰胺作 诱导剂（射线、顺铂等） ，促使细胞中 染色体断裂，产生微核。 微核经Giemsa染色后呈紫红色，胞 质被染成淡灰蓝色

器材与试剂 ·显微镜、载玻片、染色缸、滴管等 培养细胞(小盖片) 甲醇固定液 PBS(pH7. 4) Gⅰemsa应用液(临用现配) Giemsa原液:PBS=1:9混合而成

器材与试剂 • 显微镜、载玻片、染色缸、滴管等 • 培养细胞（小盖片） • 甲醇固定液 • PBS（pH7.4） • Giemsa应用液（临用现配） Giemsa原液：PBS＝1：9混合而成

操作 培养细胞(小盖片)——加环 磷酰胺1mg/m2PBS洗涤3次 甲醇固定5 min--Giemsa染色 5min——自来水冲洗——显微镜 下观察—计数

操 作 培养细胞（小盖片）——加环 磷酰胺1mg/ml——PBS洗涤3次— —甲醇固定5min——Giemsa染色 5min——自来水冲洗——显微镜 下观察——计数 24h

微核的计算 先用低倍镜粗检,后用高倍镜,选 择细胞分布均匀,细胞无损,着色适当 的区域,计数。 每张玻片计数100-200个细胞,按 “1%‰”计算微核的出现率,微核计数以 “细胞”为单位,即一个细胞中出现2个 或2个以上微核时,只按“1”计算

微核的计算 先用低倍镜粗检，后用高倍镜，选 择细胞分布均匀，细胞无损，着色适当 的区域，计数。 每张玻片计数100-200个细胞，按 “1‰”计算微核的出现率，微核计数以 “细胞”为单位，即一个细胞中出现2个 或2个以上微核时，只按“1”计算

结果 微核大多数呈单个圆形,边缘光滑 整齐,嗜色性与核质相一致,呈紫红色 或蓝紫色

结 果 微核大多数呈单个圆形，边缘光滑 整齐，嗜色性与核质相一致，呈紫红色 或蓝紫色

macronucleus micronucleus Paramecium caudatum

micronucleus