福建医科大学：《药物分析实验》课程教学课件（PPT讲稿）实验十 氯霉素眼药水的高效液相色谱分析

药物分析实验十氯霉素眼药水的高效液相色谱分析

氯霉素眼药水的高效液相色谱分析 药物分析实验十

福建医科大学OFUJIAN MEDICAL UNIVERSITY眼药水中的氯霉素的测定氯霉素滴眼液其主要成份氯霉素氯霉素滴眼液辅料为硼酸、硼砂、氯化钠、防腐剂氯霉素滴等，为无色或几乎无色的澄明液体。品批收期率：20测定氯霉素滴眼液中氯霉素的含广州东康药业有限公司量，由于滴眼液中存在的辅料的干扰OH首先要分离得到氯霉素的纯样品。因此，采用高效液相色谱法来进行测试HNEC用外标标准曲线法定量。CIC氯霉素

眼药水中的氯霉素的测定 氯霉素滴眼液其主要成份氯霉素， 辅料为硼酸、硼砂、氯化钠、防腐剂 等，为无色或几乎无色的澄明液体。 测定氯霉素滴眼液中氯霉素的含 量，由于滴眼液中存在的辅料的干扰， 首先要分离得到氯霉素的纯样品。因 此，采用高效液相色谱法来进行测试， 用外标标准曲线法定量。 氯霉素

福建医科大学foFUJIAN MEDICAL UNIVERSITY外标标准曲线法色谱定量：成份A眼药水稀峰面积与样品浓度释液成正比。峰面积A样品一系列已成份A知浓度的V氯霉素溶液峰面积A对照浓度：Ci，C2，C3，C4，C5峰面积：A，Az，A，A4，AC

成份 A 成份 A 峰面积A样品 峰面积A对照 外标标准曲线法 色谱定量： 峰面积与样品浓度 成正比。 一系列已 知浓度的 氯霉素溶 液 眼药水稀 释液 C Ai 浓度： C1，C2，C3，C4，C5 峰面积：A1，A2，A3，A4，A5

福建医科大学OFUJIAN MEDICAL UNIVERSITY液相色谱的基本流程图流动相预备柱ABGDE色谱柱进样阀检测器高压泵检测分离计算机泵输液进样

液相色谱的基本流程图 流动相 高压泵 色谱柱 检测器 泵输液 分离 检测 计算机 A E G B C D 进样阀 F 进样 预备柱

福建医科大学oFUJIAN MEDICAL UNIVERSITY氯霉素含量的测定1、对照品溶液配制精密称取5.0mg氯霉素样品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，配成0.1mg/mL母液。分别移取1mL，2mL，3mL，4mL，5mL母液于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配成0.01，0.02，0.03，0.04，0.05mg/mL的标准溶液。眼药水样品配制2、精密吸取眼药水0.5mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度

氯霉素含量的测定 精密吸取眼药水0.5mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至 刻度。 1、对照品溶液配制 2、眼药水样品配制 精密称取5.0mg氯霉素样品于10mL容量瓶中，用甲醇溶 解定容，配成0.1mg/mL母液。分别移取1mL，2mL，3mL， 4mL，5mL母液于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配成 0.01，0.02，0.03，0.04，0.05mg/mL的标准溶液

福建医科大学OFUJIAN MEDICAL UNIVERSITY色谱操作步骤：1、依次打开检测器、泵的开关2、打开电脑主机，打开操作界面3、排气泡4、设置色谱条件，打开泵开关5、让流动相冲洗色谱系统，至色谱基线水平，约半小时6、基线调零，填写数据文件名及信息7、进样并记录数据8、数据处理及打印报告9、冲洗色谱系统约半小时，关机

色谱操作步骤： 1、依次打开检测器、泵的开关 2、打开电脑主机，打开操作界面 3、排气泡 4、设置色谱条件，打开泵开关 5、让流动相冲洗色谱系统，至色谱基线水平，约半小时 6、基线调零，填写数据文件名及信息 7、进样并记录数据 8、数据处理及打印报告 9、冲洗色谱系统约半小时，关机

福建医科大学foFUJIAN MEDICAL UNIVERSITY色谱条件：色谱仪岛津LC-15C高效液相色谱色谱柱C18柱（5um，150×4.6mm或250×4.6mm）柱温室温流动相甲醇：水（60：40）（150短柱）甲醇：水（80：20)（250长柱）流速1.000ml/min波长272nm

色谱条件： 色谱仪 岛津LC-15C高效液相色谱 色谱柱 C18柱（5µm，150×4.6mm或250×4.6mm） 柱温 室温 流动相 甲醇∶水（60∶40）（150短柱） 甲醇∶水（80∶20）（250长柱） 流速 1.000ml/min 波长 272nm

福建医科大学OFUJIAN MEDICAL UNIVERSITY泵一柱泵一柱3、色谱测试用清洗溶剂清洗微量进样针三次，用排放排放待测溶液润洗三次进样进样w吸取待测溶液25uL六通阀进样，得色谱图。Inject：插入针头Load：打入样品Inject：样品进入色谱

泵 柱 进样 排放 泵 排放 柱 进样 定量环 六通阀 Inject：插入针头 Load：打入样品 Inject：样品进入色谱 3、色谱测试 用清洗溶剂清洗 微量进样针三次，用 待测溶液润洗三次， 吸取待测溶液25μL， 进样，得色谱图

福建医科大学OFUJIAN MEDICAL UNIVERSITY数据记录氯霉素对照品标准曲线：隔两分钟进样一次，浓度从低到高，记录在一张谱图上。第二次进样时断开六通阀进样感应。氯霉素眼药水样品曲线：单独进样，单独记录谱图

数据记录 标准曲线：隔两分钟进样一 次，浓度从低到高，记录在 一张谱图上。第二次进样时 断开六通阀进样感应。 样品曲线：单独进样，单 独记录谱图