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天津大学:《制药工艺学》课程教学资源(PPT课件)第三章 基因工程制药工艺

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资源类别:文库
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1. 基因工程制药微生物表达系统 2. 基因工程大肠杆菌的构建技术 3. 基因工程菌的发酵培养与控制 4. 重组人干扰素生产工艺
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第三章基因工程制药工艺 1.基因工程制药微生物表达系统 2. 基因工程大肠杆菌的构建技术 3. 基因工程菌的发酵培养与控制 4. 重组人干扰素生产工艺

1. 基因工程制药微生物表达系统 2. 基因工程大肠杆菌的构建技术 3. 基因工程菌的发酵培养与控制 4. 重组人干扰素生产工艺 第三章 基因工程制药工艺

基因工程制药 工程菌种类 基因工程菌: 微生物为操作对象,通过基因工程技术获得的表 达外源基因或过量或抑制表达自身基因的工程生 物体。 种类: 细菌和酵母是重要的表达重组药物的制药生物

基因工程菌: 微生物为操作对象,通过基因工程技术获得的表 达外源基因或过量或抑制表达自身基因的工程生 物体。 种类: 细菌和酵母是重要的表达重组药物的制药生物。 基因工程制药 工程菌种类

基因工程制药 工程菌种类 3.1基因工程制药微生物表达系统 3.1.1大肠杆菌表达系统 3.1.1酵母表达系统

3.1 基因工程制药微生物表达系统 3.1.1 大肠杆菌表达系统 3.1.1 酵母表达系统 基因工程制药 工程菌种类

基因工程制药 工程菌种类 3.1.1 大肠杆菌表达系统 1、大肠杆菌(Eschericlia coli)形态特征 细胞:G一,单细胞,杆状。鞭毛,无芽孢,一般 无荚膜。裂殖。 菌落:白色至黄白色,光滑,直径2-3mm。 周质 细胞壁 外腹 细胞 纤毛 核糖体 间体 细胞质 鞭毛 拟核 DNA

细胞:G-,单细胞,杆状。鞭毛,无芽孢,一般 无荚膜。裂殖。 菌落:白色至黄白色,光滑,直径2-3mm。 3.1.1 大肠杆菌表达系统 1、大肠杆菌(Eschericlia coli)形态特征 基因工程制药 工程菌种类

基因工程制药 工程菌种类 2、生化与遗传特性 能在仅有碳水化合物和氨、磷及微量元素的无 机盐的极限培养基上生长,发酵糖,产气产酸。 基因工程中使用菌株:K一12株的衍生菌株。 基因组:4.6Mb,3000多种蛋白质。 染色体DNA为环状双链,核外遗传物质为质粒

2、生化与遗传特性 能在仅有碳水化合物和氮、磷及微量元素的无 机 盐的极限培养基上生长,发酵糖,产气产酸。 基因工程中使用菌株:K-12株的衍生菌株。 基因组:4.6 Mb,3000多种蛋白质。 染色体DNA为环状双链,核外遗传物质为质粒。 基因工程制药 工程菌种类

基因工程制药 工程菌种类 3、质粒载体 Ec001092674 BstAPI 179 4atl2617 Ndel 183 Sspl 2501 Ehel 235 Pdml 2294 Bcgl 2215 2486 146/ 236 lacz MCS Scal 2177 复制起始点 469 选择标记 pUC18/19 Sapl 683 2686bp 多克隆位点 852. Aflll,BspLU111 806 GS1784, 1626 G10l1779 1466 Ec031l1766 Eam105l1694 p(pMB1) Ga1l1217

复制起始点 选择标记 多克隆位点 3、质粒载体 基因工程制药 工程菌种类

基因工程制药 工程菌种类 质粒类型 严紧型质粒:在每个宿主细胞只能复制少数几 个拷贝的质粒,pSC101; 。松弛型质粒:在每个细胞中能复制几十至几百 个拷贝数的质粒,pMB1和coIE1。 。克隆质粒:用于克隆和扩增外源基因。 测序质粒:用于基因测序。 整合质粒:用于外源基因与宿主染色体整合。 ~穿梭质粒:能在两种宿主细胞存在。 。表达质粒:能表达基因产物

质粒类型 ❖ 严紧型质粒:在每个宿主细胞只能复制少数几 个拷贝的质粒,pSC101; ❖ 松弛型质粒:在每个细胞中能复制几十至几百 个拷贝数的质粒,pMB1和colE1。 ❖ 克隆质粒:用于克隆和扩增外源基因。 ❖ 测序质粒:用于基因测序。 ❖ 整合质粒:用于外源基因与宿主染色体整合。 ❖ 穿梭质粒:能在两种宿主细胞存在。 ❖ 表达质粒:能表达基因产物 基因工程制药 工程菌种类

基因工程制药 工程菌种类 4、产物表达形式 不溶性蛋白质:细胞质内形成包涵体 可溶性蛋白质:存在于细胞质 周质表达:外源蛋白被运输分泌到周质,可溶性。有 利于分离和减少蛋白酶降解,避免N端附加蛋氨酸。 胞外分泌表达:胞内可溶性蛋白质分泌到胞外的培 养液中

4、产物表达形式 不溶性蛋白质:细胞质内形成包涵体 可溶性蛋白质:存在于细胞质 周质表达: 外源蛋白被运输分泌到周质,可溶性。有 利于分离和减少蛋白酶降解,避免N端附加蛋氨酸。 胞外分泌表达:胞内可溶性蛋白质分泌到胞外的培 养 液中。 基因工程制药 工程菌种类

基因工程制药 工程菌种类 5、优点和不足 发展最早、应用最广泛的经典的表达系统。 具有遗传背景清楚、目标基因表达水平高(高达70 %),培养周期短,抗污染能力强。 不能用于加工修饰化(糖基化、酰胺化)蛋白表达。 细胞死亡后,细胞壁脂多糖游离出来,形成内毒素, 具有抗原性,产生热源。 N端增加的蛋氨酸也容易引起免疫反应

5、优点和不足 发展最早、应用最广泛的经典的表达系统。 具有遗传背景清楚、目标基因表达水平高(高达70 %),培养周期短,抗污染能力强。 不能用于加工修饰化(糖基化、酰胺化)蛋白表达。 细胞死亡后,细胞壁脂多糖游离出来,形成内毒素, 具有抗原性,产生热源。 N端增加的蛋氨酸也容易引起免疫反应。 基因工程制药 工程菌种类

基因工程制药 工程菌种类 6、应用 大量外源基因能超量的表达,18种药物上市。 ÷多肽类2种(甲状旁腺激素(1-34)、利尿钠肽) 激素:胰岛素及2种突变体、8种生长素(1种PEG化) 8 细胞因子类:5种干扰素α(1种PEG化)、干扰素β和 Y,2种G-CSF(1种PEG化),白介素-2、白介素-11、 白介素-1拮抗剂 溶栓酶类:rPA 白喉毒素-IL2融合蛋白、0sA脂蛋白(疫苗)等

6、应用 ❖ 大量外源基因能超量的表达, 18种药物上市。 ❖ 多肽类2种(甲状旁腺激素(1-34)、利尿钠肽) ❖ 激素:胰岛素及2种突变体、8种生长素(1种PEG化) ❖ 细胞因子类:5种干扰素(1种PEG化)、干扰素和 ,2种G-CSF(1种PEG化),白介素-2、白介素-11、 白介素-1拮抗剂 ❖ 溶栓酶类:rPA ❖ 白喉毒素-IL 2融合蛋白、OspA脂蛋白(疫苗)等。 基因工程制药 工程菌种类

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