遵义医科大学附属医院医学检验科：《临床检验仪器与技术》课程教学资源（PPT课件讲稿）第二章 光谱分析仪器与技术（主讲：王方远）

盈务需些挖 《临床检验仪器与技术》 ZUNYI MEDICAL UNIVERSITY 第二章光谱分析仪器与技术 王方远 fywang@zmc.edu.cn 医学检验系临床微生物免疫检验教研室

第二章 光谱分析仪器与技术 王方远 fywang@zmc.edu.cn 医学检验系 临床微生物免疫检验教研室 《临床检验仪器与技术》

1.血清中无机磷如何测定？ 磷酸+钼酸试剂 →磷钼酸 氯化亚锡 磷钼酸 钼蓝（蓝色） 2.铅、汞中毒常用的检测方法？ ·石墨原子吸收光谱法 ·氢化物发生-原子荧光测定法 3.临床上血清、尿液中免疫球蛋白的检测？ 散射

1. 血清中无机磷如何测定？ 2. 铅、汞中毒常用的检测方法？ 3. 临床上血清、尿液中免疫球蛋白的检测？ 散射

目录 第一节吸收光谱分析仪器与技术 一、紫外可见分光光度分析仪器与技术 二、原子吸收分光光度分析仪器与技术 第二节发射光谱分析仪器与技术 一、原子发射光谱分析仪器与技术 二、荧光分析仪器与技术 第三节散射光谱分析仪器与技术（了解） 一、散射光谱技术基本原理 二、常用浊度法分析仪器

目 录 第一节 吸收光谱分析仪器与技术 一、紫外-可见分光光度分析仪器与技术 二、原子吸收分光光度分析仪器与技术 第二节 发射光谱分析仪器与技术 一、原子发射光谱分析仪器与技术 二、荧光分析仪器与技术 第三节 散射光谱分析仪器与技术（了解） 一、散射光谱技术基本原理 二、常用浊度法分析仪器

教学大纲要求 1.掌握光的基本性质、郎伯-比尔定律； 2.掌握紫外-可见、原子吸收分光光度仪器的基本结构、各 部件的基本功能及仪器的类型； 3.熟悉荧光分析仪器与技术的工作原理、结构和分析方法； 4.了解原子发射光谱分析仪器的工作原理、结构和分析方 法； 5.了解散射光谱技术基本原理和常用的浊度法分析仪器

教学大纲要求 1. 掌握光的基本性质、郎伯-比尔定律； 2. 掌握紫外-可见、原子吸收分光光度仪器的基本结构、各 部件的基本功能及仪器的类型； 3. 熟悉荧光分析仪器与技术的工作原理、结构和分析方法； 4.了解原子发射光谱分析仪器的工作原理、结构和分析方 法； 5. 了解散射光谱技术基本原理和常用的浊度法分析仪器

光谱分析技术 ·光谱分析技术是利用物质具有吸收光、发射光或散 射光的特征，对物质进行定性、定量分析的一类分 析方法。 ·光谱分析技术在生物化学检验中是最基本和最常用 的，它因具有灵敏、准确、快速、简便、选择性好 等特点而被广泛使用

光谱分析技术 • 光谱分析技术是利用物质具有吸收光、发射光或散 射光的特征，对物质进行定性、定量分析的一类分 析方法。 • 光谱分析技术在生物化学检验中是最基本和最常用 的，它因具有灵敏、准确、快速、简便、选择性好 等特点而被广泛使用

第一节吸收光谱分析仪器与技术

第一节 吸收光谱分析仪器与技术

紫外-可见分光光度分析仪器与技术 (一)光的基本性质 一光是一种电磁波，具有波动性和粒子性。 C=Av=No 光的波长可用纳米 (nm)为单位来表示。 E=hy hC/ Gamma-Rays Radiowave Microwaves X-Rays Infra Red 10 10 16 10 10 10 10 1010 10 10 UV Visible light 200 300 40 00 600 700 紫外光区：200~400nm 可见光区：400~780nm(760-800) ultraviolet visible

一、紫外-可见分光光度分析仪器与技术 （一）光的基本性质 – 光是一种电磁波，具有波动性和粒子性。 – 光的波长可用纳米（nm）为单位来表示。 紫外光区： 200 ~ 400 nm 可见光区：400 ~ 780 nm（760-800） C = λν = λ/σ E = hν = hC/λ ultraviolet visible

紫外-可见分光光度分析仪器与技术 (二)光的选择吸收与物质颜色的关系 物质的分子或离子团对可见和紫外光区的光波具有选择性吸 收作用。 互补光：可见光谱分析要求被测溶液的颜色与所用的单色光 互补，以求达到溶液对光的最大吸收 760 Vnm 颜色 互补光 650 00 400-450 素 黄绿 450 450-480 固 黄 480-490 绿蓝 极 610 480 490-500 监绿 500-560 绿 560-580 黄绿 580 490 图3：矿物吸收黄色以下的光谱橙红 580-610 图2：白光进入透明矿物晶体， 黄 光战 色部分透过，残余红色部分进入眼 610-650 橙 绿蓝 晴，看到的就是红色 560 500 650-760 蓝绿

一、紫外-可见分光光度分析仪器与技术 （二）光的选择吸收与物质颜色的关系 物质的分子或离子团对可见和紫外光区的光波具有选择性吸 收作用。 互补光：可见光谱分析要求被测溶液的颜色与所用的单色光 互补，以求达到溶液对光的最大吸收 实例： 1)高锰酸钾吸收绿光显紫 红色； 2)重铬酸钾吸收蓝光显黄 色； 3)邻菲罗啉铁溶液吸收蓝 绿光显红色

紫外-可见分光光度分析仪器与技术 (三)紫外-可见分光光度技术 √1.朗伯-比尔定律(Lambert-Beer Law) 朗伯-比尔定律：当一束平行单色光垂直照射到任一均匀非散射 的吸光物质时，吸光度与与该吸光物质的浓度及吸收层的厚度 成正比。 其数学表达式为：A=kbC 朗伯-比尔定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据

一、紫外-可见分光光度分析仪器与技术 （三）紫外-可见分光光度技术 ✓ 1.朗伯-比尔定律（Lambert-Beer Law） 其数学表达式为： A = kbc 朗伯-比尔定律：当一束平行单色光垂直照射到任一均匀非散射 的吸光物质时，吸光度与与该吸光物质的浓度及吸收层的厚度 成正比。 朗伯-比尔定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据

紫外-可见分光光度分析仪器与技术 (三)紫外-可见分光光度技术 √1.朗伯-比尔定律(Lambert-Beer Law) 透光度：用T表示，T=1/ 吸光度（absorbance.)：即物质对入射光的吸收程度，用A表示 A=-Ig T=Ig (1/T)=Ig (I/I)=kbc k(ε)的大小反映了物质对光的吸收能力，ε越大表明该物质 的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。 ε>105：超高灵敏；ε=(6~10)×104：高灵敏；e<2X104:不灵敏

一、紫外-可见分光光度分析仪器与技术 （三）紫外-可见分光光度技术 ✓ 1.朗伯-比尔定律（Lambert-Beer Law） 透光度：用T表示，T= I/ I0 吸光度（absorbance）：即物质对入射光的吸收程度，用A表示 A = －lg T = lg（1 / T） = lg（I0 / I）= kbc k（ ε ）的大小反映了物质对光的吸收能力，ε越大表明该物质 的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。 ε > 105：超高灵敏； ε = (6～10）×104 ：高灵敏； ε < 2×104 ：不灵敏