《微生物学》课程教学课件（PPT讲稿）实验二 细菌的特殊染色技术

实验二细菌的特殊染色技术

实验二 细菌的特殊染色技术

目的要求 学习并掌握芽孢染色法。 初步了解芽孢杆菌的形态特征。 学习并掌握荚膜染色法

一、目的要求 ◼ 学习并掌握芽孢染色法。 ◼ 初步了解芽孢杆菌的形态特征。 ◼ 学习并掌握荚膜染色法

二、基本原理 用着色力强的染色剂孔雀绿，在加热条 件下染色，使染料不仅进入菌体也可进 入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被 脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱， 再用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍 保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被 染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易 于区分

二、基本原理 ◼ 用着色力强的染色剂孔雀绿，在加热条 件下染色，使染料不仅进入菌体也可进 入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被 脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱， 再用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍 保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被 染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易 于区分

荚膜是包围在细菌胞外的一层粘液状或 胶质装物质，其成分为多糖、糖蛋白或 多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱、不 易着色：而且可溶于水，易在用水冲洗 时被除去。所以通常用衬托染色法染色 使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在 菌体周围形成一透明圈。由于荚膜含水 量高，制片时通常不用热固定，以免变 形影响观察

◼ 荚膜是包围在细菌胞外的一层粘液状或 胶质装物质，其成分为多糖、糖蛋白或 多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱、不 易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗 时被除去。所以通常用衬托染色法染色， 使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在 菌体周围形成一透明圈。由于荚膜含水 量高，制片时通常不用热固定，以免变 形影响观察

三、器材 菌种枯草芽孢杆菌约2d营养琼脂斜 面培养物；褐球固氮菌约2d无氮培养 基琼脂斜面培养物。 染色剂5%孔雀绿水溶液，0.5%番红 水溶液，绘图墨水。 仪器和其他用具小试管，滴管，烧杯 试管架，载玻片，盖玻片，滤纸，木夹 子，显微镜等

三、器材 ◼ 菌种 枯草芽孢杆菌约2d营养琼脂斜 面培养物；褐球固氮菌约2d无氮培养 基琼脂斜面培养物。 染色剂 5%孔雀绿水溶液，0.5%番红 水溶液，绘图墨水。 仪器和其他用具 小试管，滴管，烧杯， 试管架，载玻片，盖玻片，滤纸，木夹 子，显微镜等

四、操作步骤 (I)Schaeffer-一Fulton氏芽孢染色法 制片常规涂片、干燥、固定。 染色 加数滴孔雀绿染液于涂片上，用木 夹夹住载玻片一端，在微火上加 热至染料冒蒸汽并开始计时，维 持5min

四、操作步骤 (1) Schaeffer—Fulton氏芽孢染色法 制片 常规涂片、干燥、固定。 染色 加数滴孔雀绿染液于涂片上，用 木 夹夹住载玻片一端，在微火上加 热至染料冒蒸汽并开始计时，维 持5min

水洗 待玻片冷却后，用缓流自来水冲 「洗，直至流出的水无色为止。 复染用番红染液复染2min。 水洗 用缓流水冲洗后，吸干。 镜检 油镜观察。芽孢呈绿色，芽孢囊 及营养体为红色

◼ 水洗 待玻片冷却后，用缓流自来水冲 洗，直至流出的水无色为止。 ◼ 复染 用番红染液复染2min。 ◼ 水洗 用缓流水冲洗后，吸干。 ◼ 镜检 油镜观察。芽孢呈绿色，芽孢囊 及营养体为红色

(2)荚膜的湿墨水染色法 制备菌和墨水混合液加一滴墨水于洁净 的载玻片上，然后挑取少量菌 体与其混合均匀。 ·加盖玻片 将一洁净盖玻片盖在混合液 上，然后在盖玻片上放一张滤 纸，轻轻按压以吸去多余的混 合液

（2）荚膜的湿墨水染色法 ◼ 制备菌和墨水混合液 加一滴墨水于洁净 的载玻片上，然后挑取少量菌 体与其混合均匀。 ◼ 加盖玻片 将一洁净盖玻片盖在混合液 上，然后在盖玻片上放一张滤 纸，轻轻按压以吸去多余的混 合液

镜检用低倍镜和高倍镜观察，背 景灰色，菌体较暗，在菌体 周围呈现明亮透明圈即为荚 膜

◼ 镜检 用低倍镜和高倍镜观察，背 景灰色，菌体较暗，在菌体 周围呈现明亮透明圈即为荚 膜

注意： ■1芽孢孔雀绿染色加热过程中，要 及时补充染液，切勿让涂膜干涸。 ■2芽孢染色水洗时，勿用瀑水对着菌 膜冲洗，以免细菌被水冲掉。 ■3荚膜湿墨水染色时，加盖玻片勿留 气泡，以免影响观察

注意： ◼ 1 芽孢孔雀绿染色加热过程中，要 及时补充染液，切勿让涂膜干涸。 ◼ 2 芽孢染色水洗时，勿用瀑水对着菌 膜冲洗，以免细菌被水冲掉。 ◼ 3 荚膜湿墨水染色时，加盖玻片勿留 气泡，以免影响观察