浙江大学：《中级化学实验》课程教学课件（讲稿）紫外分光光度技术

紫外分光光度技术张培敏

紫外分光光度技术 紫外分光光度技术 张培敏

一、实验目的1：通过实验了解食品防腐剂的紫外光谱吸收特性，并利用这些特性对食品中所含的防腐剂进行定性鉴定。2，掌握计算机处理光谱分析数据的方法，并对食品中防腐剂的含量进行定量测定3.掌握双光束紫外分光光度仪的测定原理与操作

一、实验目的 1．通过实验了解食品防腐剂的紫外光谱吸 收特性，并利用这些特性对食品中所含的 防腐剂进行定性鉴定。 2．掌握计算机处理光谱分析数据的方 法，并对食品中防腐剂的含量进行定量测 定。3.掌握双光束紫外分光光度仪的测定原理与 操作

二、基本原理（一）定性分析据吸收曲线的特性（峰强度、位置及数目等)研究分子结构(二)定量分析—一Lambert-Beer 定律(三)双光束紫外分光光度法测定原理（四）：吸光度测量的条件选择

二、基本原理 （一）定性分析——据吸收曲线的特性(峰 强度、位置及数目等)研究分子结构 （二）定量分析——Lambert-Beer 定律 (三)双光束紫外分光光度法测定原理 （四）．吸光度测量的条件选择

(一）、定性1．吸收光谱（吸收曲线）：不同波长光对样品作用不同，吸收强度不同以入-A作图next2．吸收光谱特征：定性依据吸收峰→入max吸收谷→入min肩峰→入sh末端吸收→饱和α一跃迁产生

（一）、定性 1．吸收光谱（吸收曲线）： 不同波长光对样品作用不同，吸收强度不同 以λ-A作图 next 2．吸收光谱特征：定性依据 吸收峰→λmax 吸收谷→λmin 肩峰→λsh 末端吸收→饱和σ-σ跃迁产生

()定性分析不同物质结构不同或者说其分子能级的能量（各种能级3能量总和)或能量间隔各异，2因此不同物质将选择性地吸收-不同波长或能量的外来辐射，4.1EB这是UV-Vis定性分析的基础。0定性分析具体做法是让不U"-4同波长的光通过待测物，经待测物吸收后，测量其对不同波3电子能级长光的吸收程度（吸光度A)，振动能级以吸光度A为纵坐标，辐射波长为横坐标作图，得到该物质E的吸收光谱或吸收曲线，据吸转动能级收曲线的特性（峰强度、位置EAL0C及数目等)研究分子结构。分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图

（一）定性分析 不 同 物 质结构不同或者说 其分子能级的能量(各 种 能 级 能量总和)或能量间隔 各 异， 因此不同物质将选择性地吸收 不同波长或能量的外来辐射， 这是UV-Vis定性分析的基础。 定性分析具体 做 法是让不 同波长的光通过待测物，经 待 测物吸收后，测量其对不同 波 长光的吸收程度(吸光 度 A )， 以吸光度A为纵坐标， 辐 射 波 长为横坐标作图，得到该物 质 的吸收光谱或吸收曲线，据 吸 收曲线的特性(峰强度 、 位 置 及数目等)研究分子结构

图示1000透60光率T%4020M1.6-门1.2-暖光1110.81I1度2AAshAmn&masAminAmEx0.4吸收光谱示意图图11-103.肩蜂4.未端吸收1.赚收峰2.容400560640480-a(nm)图11-2织垒标不同的吸收光谱图KMnO.溶液的四种浓度：5、10、back20,40ng/L，1em厚

图示 back

CHOACA1对比吸收光谱的一致性OH0.2酷酸凌尼松同一测定条件下，与标准对照物谱图或标准谱图OAcOH进行对照比较0.2酷酸氢化可的松CHOACOH0.2酷酸可的松220260.300340nm三种留体激素的紫外吸收光器（10g/ml甲醇洛液）

1．对比吸收光谱的一致性 同一测定条件下， 与标准对照物谱图或标准谱图 进行对照比较

续前2.对比吸收光谱的特征值Amax , Emax , El%+ sh，minCHH.OHCH-OCOCHHHHHHHCH.快诺酮（M=298.43)安宫黄体间（M=386.53）Aau=240±1mmAm=240±1mmE=571E12-408

续前 2．对比吸收光谱的特征值 min 1% λ max ，ε max ，E1cm + λ sh ，λ

(二)、 定量假设一束平行单色光通过一个吸光物体Lamber定律：A α lBeer定律：A oc CdxX=0X=1图11-3光通过截面积S厚度的吸光介质

假设一束平行单色光通 过一个吸光物体 Beer A C Lamber A l ∝ ∝ 定律： 定律： (二)、定量

Lambert-Beer定律当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度A与其浓度和液层厚度成正比，即A = kbck为比例系数，与溶液性质、温度和入射波长有关>当浓度以g/L表示时，称k为吸光系数，以a表示，即A= abcy当浓度以mo//L表示时，称k为摩尔吸光系数，以ε 表示，即A=εbc8比a更常用。ε越大，表示方法的灵敏度越高。ε与波长有关，因此，ε常以,表示

Lambert-Beer 定律 当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度A与其 浓度和液层厚度成正比，即 k 为比例系数，与溶液性质、温度和入射波长有关 Ô 当浓度以 g/L 表示时，称 k 为吸光系数， 以 a 表示，即 Ô 当浓度以mol/L表示时，称 k 为摩尔吸光系 数，以ε 表示，即 ε 比 a 更常用。ε 越大，表示方法的灵敏度越高。 ε 与波长有关，因此，ε 常以ελ表示。 A = kbc A = abc A = εbc