《微生物实验》实验三 培养基的配制及湿热灭菌、玻璃器皿的干热灭菌

实 三 培养基的配制及湿热灭菌;玻 璃器皿的干热灭菌

实 验 三 培养基的配制及湿热灭菌；玻 璃器皿的干热灭菌

实验目的 ●明确培养基的配制原理;通过对基础培 养基的配制,掌握配制培养基的一般方 法和步骤。 学习高压蒸汽灭菌的操作方法;学习干 热灭菌的操作技术

一、实验目的 ⚫ 明确培养基的配制原理；通过对基础培 养基的配制，掌握配制培养基的一般方 法和步骤。 ⚫ 学习高压蒸汽灭菌的操作方法；学习干 热灭菌的操作技术

实验原理 c培养基 c据组成成分可分为: 1合成培养基:由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基:有一部分纯化学物质和另一部分天然物 质配制而成 3.天然培养基:利用天然来源的有机物配制而成 c剧用途可分为 1.基础培养基:能满足各种微生物的营养需求 加富培养基:加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质, 使其快速生长,便于分离 3选择培养基:加入某种物质抑制其他微生物生长,使目 标微生物得到富集,便于分离 4.鉴别培养基:用来检测微生物的某些代谢特性

实验原理 培养基 据组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物 质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。 剧用途可分为 1.基础培养基：能满足各种微生物的营养需求 加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质， 使其快速生长，便于分离 3.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目 标微生物得到富集，便于分离 4.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性

●从培养基的物理状态可分为 1液体培养基:不加凝固剂的液体状态培养基。 2固体培养基:在液体培养基中加入2%左右的凝固剂 的固体状态的培养基或农副产品培养基。 3半固体培养基:在液体培养基中加入020.5%凝固 剂而成的半固体状培养基

⚫ 从培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂 的固体状态的培养基或农副产品培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固 剂而成的半固体状培养基

消毒:使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的 方法。 灭菌:采用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物的方 法 ●干热灭菌法:电热烘箱作为干热灭菌器 ●加压蒸汽灭菌法其步骤如下: 1.灭菌器内加入一定量的水,将包扎好的物品放入其中。 2.接通电源,进行加热 3.排除高压锅内的冷空气,可将排气阀打开,待排出大 气后关闭排气阀;或关闭排气阀,待压力上升到 0.5kg/cm2时再打开排气阀,待压力回复到0时再关闭排气 阀 4.当压力达1.05kg/cm2时,此时灭菌器内的温度为1210C, 维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸 等物时,应适当降低压力,延长时间。 5灭菌时间一到,切断电源,待压力降至零时,才能打开 排气阀,然后打开灭菌器盖,取出物品

⚫ 消毒：使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的 方法。 ⚫ 灭菌：采用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物的方 法。 ⚫ 干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器 ⚫ 加压蒸汽灭菌法其步骤如下： 1.灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 2.接通电源，进行加热 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大 气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到 0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气 阀。 4.当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为1210C， 维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸 等物时，应适当降低压力，延长时间。 5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开 排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品

●间歇灭菌法: 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里, 每天蒸煮1次,每次煮沸1h,连续3d 重复进行。在每两次蒸煮之间,将物 品(指培养基)放在37C恒温条件下 培养过夜,这样可以使每次蒸煮后未 杀死残留的芽孢萌发成营养体,以便 下次蒸煮时杀灭。 ●过滤除菌法: 不能用加热灭菌的液体物质(如维生 素、血清),一般可用细菌过滤器进 行除菌

⚫ 间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里， 每天蒸煮1次，每次煮沸1h，连续3d 重复进行。在每两次蒸煮之间，将物 品（指培养基）放在370C恒温条件下 培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未 杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便 下次蒸煮时杀灭。 ⚫ 过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质（如维生 素、血清），一般可用细菌过滤器进 行除菌

紫外线灭菌法: 般30W灯管,9m3空间,距地面2m每次打开 紫外线照射0.5h,就使室内空气灭菌。若照射 紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂,可增强 灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力,但穿透 力弱,即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫 外线滤除,因此只适用于空气及表面杀菌。 化学药剂消毒灭菌: 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲 醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸 漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液,它们有的是 杀菌剂,有的是抑菌剂

⚫ 紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开 紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射 紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强 灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透 力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫 外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。 ⚫ 化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲 醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、 漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是 杀菌剂，有的是抑菌剂

实验材料 药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯 蔗糖;可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3 MgSO47H2O、FeSO47H2O等。 ●高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器 紫外线杀菌灯。 ●其它:天平、牛角匙、电炉、1NHCl、1 NAoh、 pH试纸、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带棉塞的 无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、包装 纸、防水纸、绳、棉花、标签等

三、实验材料 ⚫ 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、 蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、 MgSO4 •7H2O、FeSO4 •7H2O等。 ⚫ 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、 紫外线杀菌灯。 ⚫ 其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、 pH试纸、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带棉塞的 无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、包装 纸、防水纸、绳、棉花、标签等

四、实验步骤 ●培养基的配制 ●分离培养微生物常用器皿的准备 ●培养基和玻璃器材的灭菌

四、实验步骤 ⚫ 培养基的配制 ⚫ 分离培养微生物常用器皿的准备 ⚫ 培养基和玻璃器材的灭菌

(一)、培养基的配制方法和步骤 ●称量:按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中 ●溶化:在搪瓷杯中加入所需水量,玻棒搅匀,加 热溶解。 调pH值:用NaOH或HC调pH,用pH试纸对照。 ●加琼脂溶化:加热过程中要不断搅拌,可适当补 水 分装:注意不要污染棉塞。 ●包扎成捆,挂上标签(必须用铅笔写),注明何 种培养基。 ●灭菌备用:培养基灭菌后必须在37C下恒温培养 24h,确定无菌生长,方可使用

（一）、培养基的配制方法和步骤 ⚫ 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 ⚫ 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加 热溶解。 ⚫ 调pH值：用 NaOH或HCl调pH，用pH试纸对照。 ⚫ 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补 水。 ⚫ 分装：注意不要污染棉塞。 ⚫ 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何 种培养基。 ⚫ 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养 24h，确定无菌生长，方可使用