《病原生物学与免疫学》课程教学资源（专题讲座）流式细胞仪原理及应用

流式细胞仪原理及应用

流式细胞仪原理及应用

流式细胞术（flowcytometry,FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术

流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式 细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对 单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分 选的新技术

流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质（如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等）进行快速测量并可分类收集的高技术

流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧 光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分 析和分选基础上发展起来的对细胞的物 理或化学性质（如大小、内部结构、 DNA、RNA、蛋白质、抗原等）进行快速 测量并可分类收集的高技术

流式细胞仪的特点>同时多参数分析>速度快：10000个细胞/秒>统计学意义：提供细胞群体的均值和分布情况>分选感兴趣的细胞

流式细胞仪的特点 同时多参数分析 速度快：10000个细胞/秒 统计学意义：提供细胞群体的均值和分布情况 分选感兴趣的细胞

一、工作原理采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率；>利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性：>用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确性

采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发 效率； 利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检 测的灵敏度和特异性； 用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数 信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确 性。 一、工作原理

1.流式细胞仪的基本结构：(1)液流系统(2)光学系统(3)数据处理系统

（1） 液流系统 （2） 光学系统 （3） 数据处理系统 1.流式细胞仪的基本结构：

（1）液流系统由样本和鞘液组成待测细胞一→单个细胞的悬液一荧光染料标记的单抗对其染色→受清洁气体压力→从样品管进入流动室形成样本流鞘液：辅助样本流被正常检测的基质液。主要作用是包裹样本流的周围，保持样本流中细胞处于喷嘴中心位置，防止其靠近孔壁而阻塞喷孔

• 由样本和鞘液组成 • 待测细胞 单个细胞的悬液 荧光染料标记的 单抗对其染色 受清洁气体压力 从样品管进 入流动室形成样本流 • 鞘液：辅助样本流被正常检测的基质液。主要作用是 包裹样本流的周围，保持样本流中细胞处于喷嘴中心 位臵，防止其靠近孔壁而阻塞喷孔。 （1）液流系统

液流系统示意图喷嘴鞘液荧光标志Focused laserbeam

喷嘴 荧光标志 Focused laser beam 鞘液 液流系统示意图

FCM的液流系统（如SampleLineSamplePressure何形成单个细胞流）Pickup TubeSample TubeSheathInput鞘液管样本管FlowChamber

FCM的液流系统（如 何形成单个细胞流） 样本管 鞘液管

（2）光学系统·激光光源：气冷式氩离子激光器分色反光镜：反射长/短波长，通过短/长波长光束成形器：两十字交叉放置的透镜透镜组：形成平行光，除去室内光滤片：长通、短通、带通光电倍增管：FSC，SSC（散射光）FL1，FL2，FL3，FL4（荧光）

• 激光光源：气冷式氩离子激光器 • 分色反光镜：反射长/短波长，通过短/长 波长 • 光束成形器：两十字交叉放臵的透镜 • 透镜组：形成平行光，除去室内光 • 滤片：长通、短通、带通 • 光电倍增管：FSC, SSC（散射光）， FL1, FL2, FL3, FL4（荧光） （2）光学系统