天津师范大学：《分析化学实验》课程教学课件（PPT讲稿）高效液相色谱法分析测定苯系化合物

药勤发自樹人《仪器分析实验》高效液相色谱法分离和测定苯系物天洋师范大学師轩Tianjin Normal University

《仪器分析实验》 高效液相色谱法分离和 测定苯系物 1

天洋师范大学師高效液相色谱法分离和测定苯系物Tianjin Normal University简介色谱法最早是由俄国植物学家Tswett在1906年研究碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法因此而得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送：色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱：同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测

简介 高效液相色谱法分离和测定苯系物 2 色谱法最早是由俄国植物学家Tswett在1906年研究碳酸钙分离 植物色素时发现的，色谱法因此而得名。后来在此基础上发展 出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。 现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送； 色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效 大大高于经典液相色谱；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可 对流出物进行连续检测

天洋师范大学師辣高效液相色谱法分离和测定苯系物Tianjin NormalUniversity简介液固吸附色谱法正相色谱法高效液相色谱法液液分配色谱法反相色谱法离子交换色谱法离子对色谱法分子排阻色谱法-

简介 高效液相色谱法分离和测定苯系物 3 高 效 液 相 色 谱 法 液固吸附色谱法 液液分配色谱法 离子交换色谱法 离子对色谱法 分子排阻色谱法 正相色谱法 反相色谱法

天洋师范大学師高效液相色谱法分离和测定苯系物Tianjin NormalUniversity实验原理反相高效液相色谱法是在液一液色谱法的基础上发展的键合相色谱法，色谱柱中被共价结合到载体（硅胶）上的是一些直链饱和烷烃，C。、C18使用的最多，它的疏水特性随碳氢链的长度而增加，在反相色谱柱中溶质由于疏水作用其滞流时间也随固定相碳氢链长度的增加而增加。溶质与固定相之间的作用主要是非极性相互作用或是疏水相互作用，因此溶剂的强度随溶剂极性的降低而增加。水是极性最强的溶剂，也是反相色谱中最弱的溶剂

实验原理 高效液相色谱法分离和测定苯系物 4 反相高效液相色谱法是在液—液色谱法的基础上发展的键 合相色谱法，色谱柱中被共价结合到载体（硅胶）上的是 一些直链饱和烷烃，C8、C18使用的最多，它的疏水特性随 碳氢链的长度而增加，在反相色谱柱中溶质由于疏水作用 其滞流时间也随固定相碳氢链长度的增加而增加。溶质与 固定相之间的作用主要是非极性相互作用或是疏水相互作 用，因此溶剂的强度随溶剂极性的降低而增加。水是极性 最强的溶剂，也是反相色谱中最弱的溶剂

天洋师范大学師高效液相色谱法分离和测定苯系物Tianjin NormalUniversity实验原理在反相色谱中，疏水性越强的化合物越容易从流动相中挤出去，因而在色谱柱中保留时间也越长。所以在反相色谱中不同的化合物根据它们的疏水特性得到分离。反相色谱的这一特点使之适合于分离带不同非极性基团的化合物和带有不同极性基团的化合物。这可通过改变流动相的溶剂及其组成和pH，以影响溶质分子与流动相的相互作用及与固定相的相互作用，改变它们的保留行为。水在流动相中的比例可以为0~100%，故可用于各种溶解特性不同的化合物的分离，从水溶性很强的化合物如氨基酸到脂溶性很强的化合物如留体都可得到理想的分离。5

高效液相色谱法分离和测定苯系物 实验原理 5 在反相色谱中，疏水性越强的化合物越容易从流 动相中挤出去，因而在色谱柱中保留时间也越长。所 以在反相色谱中不同的化合物根据它们的疏水特性得 到分离。反相色谱的这一特点使之适合于分离带不同 非极性基团的化合物和带有不同极性基团的化合物。 这可通过改变流动相的溶剂及其组成和pH，以影响 溶质分子与流动相的相互作用及与固定相的相互作用， 改变它们的保留行为。水在流动相中的比例可以为 0~100%，故可用于各种溶解特性不同的化合物的分 离，从水溶性很强的化合物如氨基酸到脂溶性很强的 化合物如甾体都可得到理想的分离

天洋师范大学師莉高效液相色谱法分离和测定苯系物Tianjin NormalUniversity实验目的·了解反相高效液相色谱基本原理·学习和掌握高效液相色谱的定性、定量方法。·了解高效液相色谱仪的结构组成，及操作方法。6

实验目的 高效液相色谱法分离和测定苯系物 • 了解反相高效液相色谱基本原理。 • 学习和掌握高效液相色谱的定性、定量方 法。 • 了解高效液相色谱仪的结构组成，及操作 方法。 6

天洋师范大学际高效液相色谱法分离和测定苯系物Tianjin NormalUniversity高效液相色谱仪的基本结构

高效液相色谱仪的基本结构 高效液相色谱法分离和测定苯系物 7

天洋师范大学師高效液相色谱法分离和测定苯系物Tianjin NormalUniversity高效液相色谱仪的基本结构进样阀·流动相脱气装置、高压输液泵（四元泵）分析柱进样阀（六通阀）废液色谱柱（柱温箱，C8）检测器流动相输液泵检测器（MWD)数据处理系统数据处理8

高效液相色谱法分离和测定苯系物 • 流动相脱气装置 • 高压输液泵（四元泵） • 进样阀（六通阀） • 色谱柱（柱温箱，C8） • 检测器（MWD） • 数据处理系统 高效液相色谱仪的基本结构 8

天洋师范大学師高效液相色谱法分离和测定苯系物Tianjin Normal UniversityWasteWastePumpPumpColumnColumnInjectLoad六通阀工作原理（流路切换）9

高效液相色谱法分离和测定苯系物 六通阀工作原理（流路切换） 9

天洋师范大学師高效液相色谱法分离和测定苯系物Tianjin NormalUniversity高效液相色谱仪的基本操作方法·开机（流速、流动相、采样时间等）·设定实验条件，平衡设置数据文件名·进样·数据处理10

高效液相色谱法分离和测定苯系物 高效液相色谱仪的基本操作方法 • 开机 • 设定实验条件（流速、流动相、采样时间等） • 平衡 • 设置数据文件名 • 进样 • 数据处理 10