华南农业大学：《农药残留分析》课程教学资源（实验指导）液相色谱法检测黄瓜中啶虫脒的残留量

液相色谱法检测黄瓜中啶虫脒的残留量 1试验目的：使学生掌握样品前处理方法及原理，熟悉前处理操作步骤与规则， 熟悉液相色谱仪的原理、构造及测定流程，掌握利用液相色谱对前处理后的样品 进行测定，能利用工作站对液相色谱条件进行设置和优化，并能对结果进行分析 2方法原理：色谱法的基本原理是利用物质在不同相中分配能力的差异而达到混 合物的分离鉴定。液相色谱法是以液体为流动相，分析物质由流动相携带，通过 色谱柱的分离，被分析物质的各组分在液-一固两相间的分配系数不同，在流动过 程中得到相应的分配和分离，使各组分流出色谱柱先后顺序不同，通过检测器检 测，转变成电信号放大，计算机采集处理，得出一张色谱图。啶虫脒经高效液相 色谱C柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。 3试剂：乙腈（分析纯）、甲醇（分析纯）、乙腈（色谱纯）、双蒸馏水、毒死蜱 标准品≥99%。 4仪器：岛津LC-20A 5标准溶液的配制 精确称取0.05g(准确至±0.2mg)标准品，置于50L容量瓶中，用甲醇溶解 并定容，成工作母液。用移液管准确移取工作母液1l到10L容量瓶中，用 甲醇定容，摇匀。此标准溶液的浓度为100μg/。通过逐级稀释，配制成 0.50mg/L、1.00mg/L、2.50mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L的标准工作液 6试验步骤 6.1样品前处理 准确称取30.0g样品于250mL具塞三角瓶中，加30mL乙腈摇匀，超声提 取15min,过滤，滤液转到100mL具塞量筒中；滤渣再加20ml乙腈，超声提 取10min,过滤。合并滤液，加10 g NaCl,振摇1min,静置分层。从l00L 具塞量筒中准确吸取上层溶液25mL于旋转蒸发仪(45℃)蒸发近干，加2L 丙酮，待净化。 固相萃取柱(NH,L.0g/6ml),用5mL丙酮+乙酸乙酯(2：1)淋洗，当溶剂液 面到达柱吸附层表面时，弃掉淋洗液，立即加入上述待净化液，用10.0L丙酮 乙酸乙酯(2：1)洗脱，将收集的洗脱液于旋转蒸发仪(45℃)浓缩至近干，用 甲醇定容至2L,在旋涡混合器上混匀，过0.45m微孔滤膜，供检测

液相色谱法检测黄瓜中啶虫脒的残留量 1 试验目的：使学生掌握样品前处理方法及原理，熟悉前处理操作步骤与规则， 熟悉液相色谱仪的原理、构造及测定流程，掌握利用液相色谱对前处理后的样品 进行测定，能利用工作站对液相色谱条件进行设置和优化，并能对结果进行分析。 2 方法原理：色谱法的基本原理是利用物质在不同相中分配能力的差异而达到混 合物的分离鉴定。液相色谱法是以液体为流动相，分析物质由流动相携带，通过 色谱柱的分离，被分析物质的各组分在液-固两相间的分配系数不同，在流动过 程中得到相应的分配和分离，使各组分流出色谱柱先后顺序不同，通过检测器检 测，转变成电信号放大，计算机采集处理，得出一张色谱图。啶虫脒经高效液相 色谱C18柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。 3 试剂：乙腈（分析纯）、甲醇（分析纯）、乙腈（色谱纯）、双蒸馏水、毒死蜱 标准品≥99%。 4 仪器：岛津 LC-20A 5 标准溶液的配制 精确称取 0.05 g（准确至±0.2 mg）标准品，置于 50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解 并定容，成工作母液。用移液管准确移取工作母液 1 mL 到 10 mL 容量瓶中，用 甲醇定容，摇匀。此标准溶液的浓度为 100 μg/mL。通过逐级稀释，配制成 0.50mg/L、1.00mg/L、2.50mg/L 、5.00mg/L、10.0mg/L 的标准工作液。 6 试验步骤 6.1 样品前处理 准确称取 30.0 g 样品于 250 mL 具塞三角瓶中，加 30 mL 乙腈摇匀，超声提 取 15 min，过滤，滤液转到 100 mL 具塞量筒中；滤渣再加 20 mL 乙腈，超声提 取 10 min，过滤。合并滤液，加 10 g NaCl，振摇 1 min，静置分层。从 100 mL 具塞量筒中准确吸取上层溶液 25 mL 于旋转蒸发仪（45℃）蒸发近干，加 2 mL 丙酮，待净化。 固相萃取柱（NH2，1.0 g/6 mL），用5 mL丙酮+乙酸乙酯（2:1）淋洗，当溶剂液 面到达柱吸附层表面时，弃掉淋洗液，立即加入上述待净化液，用10.0 mL丙酮+ 乙酸乙酯（2:1）洗脱，将收集的洗脱液于旋转蒸发仪（45℃）浓缩至近干，用 甲醇定容至2 mL，在旋涡混合器上混匀，过0.45 m微孔滤膜，供检测

6.2上机测定 6.2.1检测条件 日本岛津LC-20A液相色谱仪，配紫外检测器、荧光检测器和化学工作站 色谱柱：TC-C1s(4.6mm×250mm,5μm) 流动相：A:乙腈：水=85：15；B:乙腈：水=80：20（改变流动相比例，看保留 时间有何变化) 流速：1mL/min 检测波长：248nm 6.2.2标准曲线 以配制好的0.50mg/L、1.00mg/L、2.50mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L的标准 工作液，在上述色谱操作条件下分别进样10L,以峰面积为Y轴、标准溶液浓度 为X轴，绘出标准曲线。 6.2.3计算公式 根据峰的保留时间确定分析的物质（同种物质在相同分析条件下保留时间相 同)，根据所测峰面积，用外标法计算样品的浓度（样品所测峰面积代入曲线方 程得出样品的浓度)

6.2 上机测定 6.2.1 检测条件 日本岛津 LC-20A 液相色谱仪，配紫外检测器、荧光检测器和化学工作站 色谱柱：TC-C18（4.6mm×250mm，5μm） 流动相：A:乙腈:水=85:15；B：乙腈:水=80:20（改变流动相比例，看保留 时间有何变化） 流速：1 mL/min 检测波长：248nm 6.2.2 标准曲线 以配制好的0.50mg/L、1.00mg/L、2.50mg/L 、5.00mg/L、10.0mg/L的标准 工作液，在上述色谱操作条件下分别进样10L，以峰面积为Y轴、标准溶液浓度 为X轴，绘出标准曲线。 6.2.3 计算公式 根据峰的保留时间确定分析的物质(同种物质在相同分析条件下保留时间相 同)，根据所测峰面积，用外标法计算样品的浓度（样品所测峰面积代入曲线方 程得出样品的浓度）