浙江大学远程教育学院：《药物分析》课程教学资源（PPT课件讲稿）第三章 药物的杂质检查 第3节 第3讲 特殊杂质的检查方法

Zhe ji ang University Press http://www.zjupress.com 药物分析 mma0e0aa06%° 姚彤炜 2021/1229 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检査方法

药物分析 pharmaceutical analysis 姚彤炜 2021/12/29 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检查方法 1

第3章药物的杂质检查(8) 主要内容 1.概述 2.一般杂质的检查方法 3.特殊杂质的检查方法 2021/1229 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检査方法

2021/12/29 2 第3章 药物的杂质检查(8) 1. 概述 2. 一般杂质的检查方法 3. 特殊杂质的检查方法 主要内容 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检查方法

·本章学习要求 掌握: 杂质限量的定义与计算方法 般杂质(氯化物、重金属、砷盐和残留溶剂) 检查原理、方法和注意事项 TLC、HPLC、GC法检查有关物质的原理与方法 熟悉: 药物的纯度概念、药物中杂质的来源与分类 其他一般杂质的检查原理、方法和注意事项 药物中特殊杂质的其它检查方法与应用 2021/1229 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检査方法

2021/12/29 3 本章学习要求 掌握： 杂质限量的定义与计算方法 一般杂质（氯化物、重金属、砷盐和残留溶剂） 检查原理、方法和注意事项 TLC、HPLC、GC法检查有关物质的原理与方法 熟悉： 药物的纯度概念、药物中杂质的来源与分类 其他一般杂质的检查原理、方法和注意事项 药物中特殊杂质的其它检查方法与应用 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检查方法

3.5分子排阻色谱法 ⑧分子排阻色谱法在药物的杂质检查中主要用于高 分子杂质的测定,如β-内酰胺类抗生素中高分子 聚合物的测定 示例 青霉素钠中青霉素聚合物的测定 ③采用葡聚糖凝胶G-10色谱柱系统 ③流动相A:pH7.0的0.1mo磷酸盐缓冲液 流动相B:水 以自身缔合物为对照,外标法计算供试品中高分 子杂质的含量 2021/1229 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检査方法

3.5 分子排阻色谱法 分子排阻色谱法在药物的杂质检查中主要用于高 分子杂质的测定，如-内酰胺类抗生素中高分子 聚合物的测定 示例——青霉素钠中青霉素聚合物的测定 采用葡聚糖凝胶G-10色谱柱系统 流动相A：pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液 流动相B：水 以自身缔合物为对照，外标法计算供试品中高分 子杂质的含量 2021/12/29 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检查方法 4

·聚合物测定原理 ⑧利用特定条件下β-内酰胺类抗生素可以缔合成 与高分子杂质有相似色谱行为的缔合物,即在 av 0处表现为单一的色谱峰 以药物自身为对照,测定其在特定条件下缔合 时的峰响应值 ③然后改变色谱条件,测定样品,记录样品色谱 图中K=0处的高分子杂质峰的响应值 按外标法计算,即得样品中高分子杂质相当于 药品本身的相对含量 2021/1229 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检査方法

2021/12/29 5 聚合物测定原理 利用特定条件下β-内酰胺类抗生素可以缔合成 与高分子杂质有相似色谱行为的缔合物，即在 Kav =0处表现为单一的色谱峰 以药物自身为对照，测定其在特定条件下缔合 时的峰响应值 然后改变色谱条件，测定样品，记录样品色谱 图中Kav =0处的高分子杂质峰的响应值 按外标法计算，即得样品中高分子杂质相当于 药品本身的相对含量 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检查方法

高聚物色谱示意图 缔合物 自身对照液 流动相B—水 流动相A 高聚物 样品液 pH7.0的磷酸盐 缓冲液 A 高聚物缔合物 2021/1229 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检査方法

2021/12/29 6 高聚物色谱示意图 流动相B——水 流动相A—— pH7.0的磷酸盐 缓冲液 缔合物 高聚物 A高聚物﹤A缔合物 自身对照液 样品液 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检查方法

·系统适用性试验 ③取蓝色葡聚糖2000溶液进样,分别以流动相A、B进 行测定,记录色谱图。按蓝色葡聚糖2000峰计 n≌400,T<2.0;在两种流动相中蓝色葡聚糖色谱峰 的tR比值在093~1.07之间 对照溶液主峰和供试液中聚合物峰与相应色谱系统中 蓝色葡聚糖峰的氓R比值应在0.93~1.07之间 取本品适量,用蓝色葡聚糖2000溶液稀释,进样,用 流动相A进行测定,高聚体的峰高与单体和高聚体之 间的谷高比应大于2.0 ③另以流动相B测定,连续进样对照液5次,峰面积的 RSD应≤50% 2021/1229 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检査方法 7

2021/12/29 7 系统适用性试验 取蓝色葡聚糖2000溶液进样，分别以流动相A、B进 行测定，记录色谱图。按蓝色葡聚糖2000峰计： n≥400，T＜2.0；在两种流动相中蓝色葡聚糖色谱峰 的tR比值在0.93～1.07之间 对照溶液主峰和供试液中聚合物峰与相应色谱系统中 蓝色葡聚糖峰的tR比值应在0.93～1.07之间 取本品适量，用蓝色葡聚糖2000溶液稀释，进样，用 流动相A进行测定，高聚体的峰高与单体和高聚体之 间的谷高比应大于2.0 另以流动相B测定，连续进样对照液5次，峰面积的 RSD应≤5.0% 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检查方法

C=AA为XC对 ·测定方法 C聚mgm) ×100%<0.08% 0.4g/10×10 对照溶液:取青霉素对照品适量,精密称定,加水溶 解并定量稀释制成每1m中约含青霉素0.mg的溶液 ③供试溶液:取本品约0.4g,精密称定,置10m量瓶中, 加水适量使溶解,并用水稀释至刻度,摇匀 ⑧测定法:立即精密量取供试溶液100~200u,注入液 相色谱仪,以流动相A为流动相进行测定,记录色谱 图。另精密量取对照溶液100~200μ,注入液相色谱 仪,以流动相B为流动相进行测定,记录色谱图 ⑧限量:按外标法以青霉素峰面积计算,青霉素聚合物 的量不得过0.08% 2021/1229 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检査方法

2021/12/29 8 测定方法 对照溶液：取青霉素对照品适量，精密称定，加水溶 解并定量稀释制成每1ml中约含青霉素0.1mg的溶液 供试溶液：取本品约0.4g，精密称定，置10ml量瓶中， 加水适量使溶解，并用水稀释至刻度，摇匀 测定法：立即精密量取供试溶液100～200l，注入液 相色谱仪，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱 图。另精密量取对照溶液100～200l，注入液相色谱 仪，以流动相B为流动相进行测定，记录色谱图 限量：按外标法以青霉素峰面积计算，青霉素聚合物 的量不得过0.08% 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检查方法 0.4g/10103 100%<0.08% C聚(mg/ml) ？ C聚= A聚/ A对×C对

3.6离子色谱法和毛细管电泳法 ⑧离子色谱法——利用物质在离子交换柱上迁移的差 异而达到分离的一种分析方法,用于药物中无机阴 阳离子、水溶性小分子杂质、抗生素中极性杂质等 的测定,如:氯膦酸二钠、海藻糖等药物或辅料中 有关物质的检查 毛细管电泳法——依据样品中各组分的淌度和/或 分配行为的差异而实现分离的一种分析方法,用于 各种离子、中性分子、手性化合物、蛋白质和多肽 DNA和核酸片段等的测定,如:盐酸头孢吡肟、 抑肽酶等药物中特殊杂质的检查 2021/1229 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检查方法

3.6 离子色谱法和毛细管电泳法 离子色谱法——利用物质在离子交换柱上迁移的差 异而达到分离的一种分析方法，用于药物中无机阴、 阳离子、水溶性小分子杂质、抗生素中极性杂质等 的测定，如：氯膦酸二钠、海藻糖等药物或辅料中 有关物质的检查 毛细管电泳法——依据样品中各组分的淌度和/或 分配行为的差异而实现分离的一种分析方法，用于 各种离子、中性分子、手性化合物、蛋白质和多肽、 DNA和核酸片段等的测定，如：盐酸头孢吡肟、 抑肽酶等药物中特殊杂质的检查 2021/12/29 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检查方法 9

·示例1——氯膦酸二钠中有关物质的 离子色谱测定法 ⑧氯膦酸二钠的有关物质主要指C}、H3PO3和 H3PO4 ③供试液:本品12mgm的水溶液 ⑧对照溶液:取供试液,稀释成12μgm水溶液 ⑧对照品溶液(1):氯化钠(含CI0.6μgm)水溶液 ⑧对照品溶液(2):亚磷酸(6μg/m)水溶液 ⑧对照品溶液(3):磷酸(6μgm)水溶液 ③色谱条件:阴离子交换色谱柱,电导检测器,流 动相为水-氢氧化钾溶液,梯度洗脱 2021/1229 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检査方法 10

示例1——氯膦酸二钠中有关物质的 离子色谱测定法 氯膦酸二钠的有关物质主要指Cl- 、 H3PO3 和 H3PO4 供试液：本品1.2mg/ml的水溶液 对照溶液：取供试液，稀释成12g/ml水溶液 对照品溶液(1)：氯化钠（含Cl-0.6 g/ml）水溶液 对照品溶液(2)：亚磷酸（6 g/ml）水溶液 对照品溶液(3)：磷酸（6 g/ml）水溶液 色谱条件：阴离子交换色谱柱，电导检测器，流 动相为水-氢氧化钾溶液，梯度洗脱 2021/12/29 第3章第3节第3讲-特殊杂质的检查方法 10