《医学微生物学》课程教学资源（书籍文献）第三章 细菌的繁殖与代谢

细菌具有独立的生命活动能力，可从外界环境中摄取营养物质，获得能量，只有代谢(Metabolism)旺盘。繁殖(Multiplication)迅速的 特点。细菌代谢过程中，可产生多种对人类的生活及医字实践有重要意义的代谢产物。 第一节细菌的营养 细菌从周围环境中吸收作为代谢活动所必需的有机或无机化合物称为营养物质。一种物质可否作为细菌的营养物质，决定于两个因素：@ 物 进入细 细菌是否具有相应的 讲人细跑的 质用于纸 @用于组 胞的各种成 一、细菌的营养物质 各类细菌对营养物质的要求差别很大。包括水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。其主要营养元素及其生理功能见表1。 表31细苗的主要营乔元燕及功能 成，提购吸中的电子受体 庆分.某业 因子 白及细的作用 1水：细菌湿重的80一90%为水.细菌代谢过程中所有的化学反应营养的吸收和卷透分池、排池均需有水才能进行 2.碳源：各种无机或有机的含酸化合物(02、碳酸盐、糖、脂肪等)都能细菌吸收利用，作为合成菌体所必需的原料，同时也作为细 菌代谢的主要能量来源。致病性细菌主要从糖类中获得碳，己糖是组成细菌内多糖的基本成分，戊糖参与细菌核酸组成. 3氯源：从分子态氯到夏杂的含化合物都可被不同的细菌利用。但多数病原菌是利用有机化物如氨基酸、蛋白陈作为氨源。少数细菌 (如固氯菌)能以空气中的游离或无机氯如硝酸盐铵盐等为源，主要用于合成菌体细跑质及其他结构成分】 。无机盐：钾、钠、钙、镁硫、铁、锰、锌、钻铜、钼等是细首生长代谢中所需的无机盐成份。除磷，钾、钠、镁、硫、铁需要 量较多外，其他只需微量。各类无机，盐的 构成菌体成份：®调节苗体内外渗透压：③促进酶的活性或作为 甘此 素素与细菌的生长繁殖及致病作月 密切相关。如白杆菌 毒株其毒索 立量显受 养基中铁含量的影响。培养基中铁浓度降至7mgL时， 量著增加毒素 培养产毒株 2制备类毒素的生 儿研突认为可雨的通是利行专降故。办有人认为底 含铁 素基因 任 生长因子：很 多细菌在其生长过程中还必需一些自身不能合成的化合物质，称为生长因子(Grow山co)生长因子必须从外界得 以补充 某些氨基酸 脂类 原岭、密啶等 子，而有些细菌如肺炎球菌则需要跳氨酸、谷氨酸、色氨酸、天冬酰胺、有 病 获得相应的生长因子】 少数细菌所需 如流行性 两种因 二、营养物质的吸收与运转 细菌的细胞腰具有选择性透过物压的作用，这对保证细菌有一个稳定的内在环境及在生长过程中不新获得各类营养物质十分重要。 水及小分子溶质可经过半透膜性质的细胞壁及细胞膜进入菌体。大分子的营养物质如蛋白质、多糖和脂类必须在细菌分论的胞外醉 (Exoenzyme)作用下，分解为小分子可溶性物质后才被吸收. 营养物质进入菌体的方式有：易化扩散、主动运转及基团移位。 1,易化扩散(Facilitated diffusion):又称简单扩散.物质进入菌体仅以该物质在菌体内外之浓度差而透入，为一种不需能量的被动吸 2.主动运转(Active transport):又称主动吸收。其特点为：@物质可逆浓度梯度由低浓度向高浓度转运；②需要能量（可由细跑膜上的 手吸链供给)，大多数营养物质靠主动吸收。当环境中细菌所需营养物压的浓度仅为菌体的干分之一，甚至更低时，靠主动吸收的方式，细菌 仍能获得其物质。主动吸收主要由菌体细胞膜内的愤嵌蛋白一透性酶(Pem©a5心)完成的。透性酶在胞膜内运转，与特定营养物质可逆性结 合，起到膜内外物质转运载体的作用。透性确在胞膜外与营养物质高亲和力牢固结合，在能量供给的条件下，逆浓度差将物质转运到菌体内， 经变构及其他尚不明确的机制，使营养物质从透性销上解离下来，释入胞质。透性薄又可转至菌体胞膜外面重复运转物质。 3.基团移位(Group translocatio】细菌对糖的吸收和积界，需要磷酸转运系统，即转运过程中必须磷酰化，这种物质运转方式称基团移 位。该过程中细胞外的糖类在细胞膜上与泡内的磷酸烯醇丙酮酸盐结合，在胞内酶作用下被磷酸化进入跑内。经过基团移位而磷酸化的糖类。 不能再透出菌体。所以，菌体内积聚的糖的浓度远远高于孢外

细菌具有独立的生命活动能力，可从外界环境中摄取营养物质，获得能量，具有代谢（Metabolism）旺盛、繁殖（Multiplication）迅速的 特点。细菌代谢过程中，可产生多种对人类的生活及医字实践有重要意义的代谢产物。 第一节 细菌的营养 细菌从周围环境中吸收作为代谢活动所必需的有机或无机化合物称为营养物质。一种物质可否作为细菌的营养物质，决定于两个因素：① 该物质能否经一定的方式进入细胞；②细菌是否具有相应的酶，使进入细胞的物质用于细菌的新陈代谢。 细菌的营养物质有两方面作用：①用于组成细菌细胞的各种成分；②供给细菌新陈代谢中所需能量。 一、细菌的营养物质 各类细菌对营养物质的要求差别很大。包括水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。其主要营养元素及其生理功能见表1。 表3-1 细菌的主要营养元素及功能 营养元素 生理功能 氢 组成细胞水分及有机物 氧 参与细胞水分及有机物合成；细胞呼吸中的电子受体 碳 细胞有机物的组成，提供能量来源 氮 蛋白质、核酸和辅酶的组成 硫 蛋白质组分、某些辅酶的组分（如辅酶A） 磷 合成菌体结构成分（如核酸、磷脂、核蛋白、辅酶） 贮存成转运能量（ATP高能磷酸键） 钾 细胞内重要的无机阳离子，某些酶的辅因子 镁 多种酶反应的辅因子，稳定核蛋白体及细胞膜的作用 锰 微量营养物质，参与某些酶的辅基 钙 芽胞成分之一，某些酶的辅因子 铁 细胞色素和过氧化氢，维生素B12及其辅酶组分 1．水：细菌湿重的80～90%为水。细菌代谢过程中所有的化学反应、营养的吸收和渗透、分泌、排泄均需有水才能进行。 2．碳源：各种无机或有机的含碳化合物（CO2、碳酸盐、糖、脂肪等）都能被细菌吸收利用，作为合成菌体所必需的原料，同时也作为细 菌代谢的主要能量来源。致病性细菌主要从糖类中获得碳，己糖是组成细菌内多糖的基本成分，戊糖参与细菌核酸组成。 3．氮源：从分子态氮到夏杂的含氮化合物都可被不同的细菌利用。但多数病原菌是利用有机氮化物如氨基酸、蛋白胨作为氮源。少数细菌 （如固氮菌）能以空气中的游离氮或无机氮如硝酸盐、铵盐等为氮源，主要用于合成菌体细胞质及其他结构成分。 4．无机盐：钾、钠、钙、镁、硫、磷、铁、锰、锌、钴、铜、钼等是细菌生长代谢中所需的无机盐成份。除磷、钾、钠、镁、硫、铁需要 量较多外，其他只需微量。各类无机盐的作用为：①构成菌体成份；②调节菌体内外渗透压；③促进酶的活性或作为某些辅酶组分；④某些元 素素与细菌的生长繁殖及致病作用密切相关。如白喉杆菌产毒株其毒素产量明显受培养基中铁含量的影响。培养基中铁浓度降至7mg/L时，可 显著增加毒素的产量，故在培养产毒株白喉杆菌PW2制备类毒素的生产中，多采用含铁很少的培养基，其毒素产量可达细菌产生蛋白量的5%以 上，约占细菌外分泌总蛋白的75%以上，使培养基含毒素量达500ug/L研究认为低铁可影响细胞壁的通透性，利于毒素释放。亦有人认为宿主 含铁蛋白可抑制白喉毒素基因，故低铁时可导致白喉毒素产量增高。 5．生长因子：很多细菌在其生长过程中还必需一些自身不能合成的化合物质，称为生长因子（Growth factor）。生长因子必须从外界得 以补充，其中包括维生素、某些氨基酸、脂类、嘌呤、嘧啶等。 各种细菌对生长因子的要求不同，如大肠杆菌很少需要生长因子，而有些细菌如肺炎球菌则需要胱氨酸、谷氨酸、色氨酸、天冬酰胺、核 黄素、腺嘌呤、尿嘧啶、泛酸、胆碱等多种生长因子。致病菌合成能力差，生长繁殖过程必需供复杂的营养物质以使其获得相应的生长因子。 有些生长因子仅为少数细菌所需，如流行性感冒杆菌需V、X两种因子，而金黄色葡萄球菌生长过程可合成较多的V因子。 二、营养物质的吸收与运转 细菌的细胞膜具有选择性透过物质的作用，这对保证细菌有一个稳定的内在环境及在生长过程中不断获得各类营养物质十分重要。 水及小分子溶质可经过半透膜性质的细胞壁及细胞膜进入菌体。大分子的营养物质如蛋白质、多糖和脂类必须在细菌分泌的胞外酶 （Exoenzyme）作用下，分解为小分子可溶性物质后才被吸收。 营养物质进入菌体的方式有：易化扩散、主动运转及基团移位。 1．易化扩散（Facilitated diffusion）:又称简单扩散。物质进入菌体仅以该物质在菌体内外之浓度差而透入，为一种不需能量的被动吸 收。 2．主动运转（Active transport）:又称主动吸收。其特点为：①物质可逆浓度梯度由低浓度向高浓度转运；②需要能量（可由细胞膜上的 呼吸链供给）。大多数营养物质靠主动吸收。当环境中细菌所需营养物质的浓度仅为菌体的千分之一，甚至更低时，靠主动吸收的方式，细菌 仍能获得其物质。主动吸收主要由菌体细胞膜内的镶嵌蛋白一透性酶（Permease）完成的。透性酶在胞膜内运转，与特定营养物质可逆性结 合，起到膜内外物质转运载体的作用。透性酶在胞膜外与营养物质高亲和力牢固结合，在能量供给的条件下，逆浓度差将物质转运到菌体内， 经变构及其他尚不明确的机制，使营养物质从透性酶上解离下来，释入胞质。透性酶又可转至菌体胞膜外面重复运转物质。 3．基团移位（Group translocation）:细菌对糖的吸收和积累，需要磷酸转运系统，即转运过程中必须磷酰化，这种物质运转方式称基团移 位。该过程中细胞外的糖类在细胞膜上与胞内的磷酸烯醇丙酮酸盐结合，在胞内酶作用下被磷酸化进入胞内。经过基团移位而磷酸化的糖类， 不能再透出菌体。所以，菌体内积聚的糖的浓度远远高于胞外

第二节细菌的生长繁殖 生长殖的三大要素。掌提细菌生长絮殖的条件、影响因索及规律对临床医学及基础研究均有重要意义 一、细菌生长繁殖的条件 1.充足的营养：必须有充足的营养物质才能为细菌的新陈代谢及生长繁殖提供必需的原料和足够的能量。 2.适宜的温度：细跑生长的温度极限为7℃~90℃.各类细苗对湿度的要求不同，可分为嗜冷菌(Psychrophiles),最适生长温度为 (10℃~20C);嗜温菌(Mesophiles),20℃~40C,嗜热菌(Thermophiles),在高至56℃~60C生长最好.病原菌均为嗜温菌，最适温度为 人体的体湿，即37℃，故实验室一般采用37℃培养细菌. 有些墙温菌低温下也可生长繁殖，如5℃冰箱内，金黄色萄萄球菊缓慢生长释放毒素，故食用过夜冰箱冷存食物，可致食物中毒。 3.合适的酸碱度：在细菌的新陈代谢过程中，酶的活性在一定的PH范围才能发挥。多数病原菌最适PH为中性或弱碱性(pH7.2-7.6) 人类血液、组织液PH为74，细萄极易生存。胃液偏酸，绝大从数细菌可被杀死。个别细菌在减性条件下生长良好，如霍乱孤菌在PH8.4~9.】 时生长最好，也有的细菌最适H偏酸，如结核杆萄(pH6.5~6,8)、乳本乡杆菌(pH5.5),细菌代谢过程中分解德产酸，PH下降，影响细菌 生长，所以培养基中应加入缓冲剂，保持PH稳定。 4.必要的气体环境：氧的存大与否和生长有关，有些细萄仅能在有氧条件下生长：有的只能在无氧环境下生长：而大多数病原菌在有氧及 无氧的条件下均能生存。一般细菌代谢中郎需C02,但大多数细菌自身代谢所产生的C02即可满足需要。有些细菌，如胞膜炎双球菌在初次分 离时需要较高浓度的C02(5~10%),否则生长很差甚至不能生长。 二、细菌生长繁殖的方式与速度 细茵的生长繁殖包活菌体各组分有规律的增长及菌体数量的增加， 细菌以简单的二分裂方式无性繁殖，其夹出的特点为繁殖速度极快，细菌分裂倍增的必须时间，称为代时(（G心 on time)细菌的代时 决定于细的种类又受环境条件的影响，细菌代时一为20一30分钟，个别菌较慢，如结核杆菌代时为 及0小时.梅烟体为3个小时 (一)细菌个体的生长繁殖 细菌一般以简单的二分裂法进行无性禁殖，个别细菌如结核杆菌偶有分枝繁殖的方式。在话宜条件下，多数细菌繁殖速度极快，分裂一次 需时仅20-30分钟。球菌可从不同平面分裂，分裂后形成不同方式排列。杆菌则沿横轴分裂。细菌分裂时，菌细胞首先增大，染色体复制。在 革兰氏阳性菌中，细菌染色体 ,中价体亦 合为 各向两端移动，分别啦复制好 根染色体移 接若细跑由的 的作用 阳的壁肽聚糖 成为两个细 后由子色 在邻近的一点上 之形成的细，将两团 色休公离 细 大肠杆菌的代时为20分钟，以此计算，在最佳条件下8小时 可繁殖到20 万上 10小时后可超过 10亿 细菌繁殖的数量可 由于细 繁殖中 关物 质的消 产物的积聚及环境PH的改 增 的速 长过程的规律 曲线（国31）· 数的对 图31细菌的生长曲线 细菌群体的生长察殖可分为四期 1.迟缓期(Lag phase)细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）·此期曲线平坦稳定，因为细 菌繁殖极少。迟缓期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1一4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分 裂增殖合成.储备充足的酶、能量及中间代谢产物。 2.对数蝴Logarithmicphase)又称指数蝴(Exponential phage).此期生长曲线上活菌数直线上升.细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续 几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异），此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性 状以此期细萄最好。抗生素作用，对该时朗的细菌效果最佳

第二节 细菌的生长繁殖 生长繁殖的三大要素。掌握细菌生长繁殖的条件、影响因素及规律对临床医学及基础研究均有重要意义。 一、细菌生长繁殖的条件 1．充足的营养：必须有充足的营养物质才能为细菌的新陈代谢及生长繁殖提供必需的原料和足够的能量。 2．适宜的温度：细胞生长的温度极限为-7℃～90℃。各类细菌对温度的要求不同，可分为嗜冷菌（Psychrophiles）,最适生长温度为 （10℃～20℃）；嗜温菌（Mesophiles）,20℃～40℃;嗜热菌（Thermophiles）,在高至56℃～60℃生长最好。病原菌均为嗜温菌，最适温度为 人体的体温，即37℃，故实验室一般采用37℃培养细菌。 有些嗜温菌低温下也可生长繁殖，如5℃冰箱内，金黄色葡萄球菌缓慢生长释放毒素，故食用过夜冰箱冷存食物，可致食物中毒。 3．合适的酸碱度：在细菌的新陈代谢过程中，酶的活性在一定的PH范围才能发挥。多数病原菌最适PH为中性或弱碱性（pH7.2～7.6）。 人类血液、组织液PH为7.4，细菌极易生存。胃液偏酸，绝大从数细菌可被杀死。个别细菌在碱性条件下生长良好，如霍乱孤菌在PH8.4～9.2 时生长最好;也有的细菌最适pH偏酸，如结核杆菌（pH6.5～6.8）、乳本乡杆菌（pH5.5）。细菌代谢过程中分解糖产酸，PH下降，影响细菌 生长，所以培养基中应加入缓冲剂，保持PH稳定。 4．必要的气体环境：氧的存大与否和生长有关，有些细菌仅能在有氧条件下生长；有的只能在无氧环境下生长；而大多数病原菌在有氧及 无氧的条件下均能生存。一般细菌代谢中都需CO2，但大多数细菌自身代谢所产生的CO2即可满足需要。有些细菌，如脑膜炎双球菌在初次分 离时需要较高浓度的CO2（5～10%），否则生长很差甚至不能生长。 二、细菌生长繁殖的方式与速度 细菌的生长繁殖包括菌体各组分有规律的增长及菌体数量的增加。 细菌以简单的二分裂方式无性繁殖，其突出的特点为繁殖速度极快。细菌分裂倍增的必须时间，称为代时（Generation time）,细菌的代时 决定于细菌的种类又受环境条件的影响，细菌代时一般为20～30分钟，个别菌较慢，如结核杆菌代时为18～20小时，梅素螺旋体为33个小时。 （一）细菌个体的生长繁殖 细菌一般以简单的二分裂法进行无性繁殖，个别细菌如结核杆菌偶有分枝繁殖的方式。在适宜条件下，多数细菌繁殖速度极快，分裂一次 需时仅20～30分钟。球菌可从不同平面分裂，分裂后形成不同方式排列。杆菌则沿横轴分裂。细菌分裂时，菌细胞首先增大，染色体复制。在 革兰氏阳性菌中，细菌染色体与中价体相连，当染色体复制时，中价体亦一分为二，各向两端移动，分别拉着复制好的一根染色体移到细胞的 侧。接着细胞中部的细胞膜由外向内陷入，逐渐伸展，形成横隔。同时细胞壁亦向内生长，成为两个子代细胞的胞壁，最后由于肽聚糖水解酶 的作用，使细胞壁肽聚糖的共价键断裂，全裂成为两个细胞。革兰氏阴性菌无中介体，染色体直接连接在细胞膜上。复制产生的新染色体则附 着在邻近的一点上，在两点之间形成新的细胞膜，将两团染色体分离在两侧。最后细胞壁沿横膈内陷，整个细胞分裂成两个子代细胞。 （二）细菌群体生长繁殖规律 细菌繁殖速度之快是惊人的。大肠杆菌的代时为20分钟，以此计算，在最佳条件下8小时后，1个细胞可繁殖到200万上，10小时后可超过 10亿，24小时后，细菌繁殖的数量可庞大到难以计数据和程度。但实际上，由于细菌繁殖中营养物质的消耗，毒性产物的积聚及环境PH的改 变，细菌绝不可能始终保持原速度无限增殖，经过一定时间后，细菌活跃增殖的速度逐渐减慢，死亡细菌逐增、活菌率逐减。 将一定数的细菌接咱适当培养基后，研究细菌生长过程的规律，以培养时间为横坐标，培养物中活菌数的对数以纵坐标，可得出一条生长 曲线（图3-1）。 图3-1 细菌的生长曲线 细菌群体的生长繁殖可分为四期： 1．迟缓期（Lag phase）:细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细 菌繁殖极少。迟缓期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分 裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。 2.对数期(Logarithmicphase):又称指数期(Exponential phage)。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续 几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性 状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳

.稳定期(S1 tationaryphas5e):该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大。由于培养基中营养物质消耗、毒性产物 (有机酸、H202等)积累PH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度新趋下降，相对细菌死亡数开始逐新增加，此期细菌增殖数与死亡数新趋 平衡。细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽抱等 4.衰亡期(Declinephas©)：随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。活菌数与培养时间呈反比关系，此明细菌变长肿 胀或畸形衰变，甚至菌体自溶，难以辩认其形。生理代谢活动趋于停滞。故陈旧培养物上难以鉴别细菌， 体内及自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线，掌握细菌生长规律 可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。 第三节细菌的新陈代谢 细菌新陈代谢有两个突出的特点：④代谢活跃。细菌菌体微小，相对表面积很大，因此，物因交换频繁。迅速，呈现十分活跃的代谢。② 代谢类型多样化。各种细菌其营养要求、能量来源。南系统。代谢产物各不相同，形成多种多样的代谢类型，适应复杂的外界环境。 细菌的代谢通路包括合成与分解两大类。细菌的合成代谢与真核细菌类似，但其分解代谢因细菌酶系统的不同，差异甚大。分解代谢可伴 有ATP及其他形式能量的产生。 一、细菌的能量代途 细菌代谢所需能量，绝大多数是通过生物氧化作用而获得的 ,所调生物氧化即在酶的作用下生物细电内所发生的系列氧化还原反应 致病菌获得能量的基质主要是类，通过的氧化或酵解释放能量，并以高能磷酸能的形式(ADP,ATP)储存能量。 细首生物氧化的类型分为呼吸与发酵，在生物化过程中，细苗的营养物（如）经氧酶作用所脱下的氢，需经过 系列中间递氧体如 铺确，铺确、黄素蛋白等)的传递转运，最后将氧交给 氢体。以无机物 受氢体的生物化过程。称 其中以分子氧为受氧体的粉 而以无机化合物（如销酸盐、硫酸盐）为受氢体的称厌氧呼吸 中以各种有机物为受氢休的称 多病原菌只 行器原吸或发 1需氧呼吸（Rs ory ：细菌的呼吸链位于细胞膜上，需氧呼吸伴有氧化磷酸化作用，产生大量能量并以高能磺酸键形式贮存于 可产生38个分子A 能量很低。通过无氧发酵 ,1分子萄萄糖只能产生2分子 ATP,仅 能通 菌的呼吸类型 主要分为四类 be)如结核杆苦 (2)专性厌氧 ()兼性 在有氧或 以有氧时9 ,大多 ia)如空肠弯曲 环中均能 宜在低氧压下生长，氧压增高对其有抑制作用 一般细菌在代谢 质 过氧 其原因 再菌缺乏细胞色素与细胞色素氧化确 和 不能消除有氧 下所产生的超氧 难以存 有氧分 。从而失去活性 ,使细菌生长受 因可有多种因素与机理 表3-2约 菊的生物氧化与产 发] 机化合 2个AP 二、细菌的代谢产物 细菌分论胞外酶将多糖、蛋白质等大分子营养物质分解为单糖、小肽或氨基酸，然后吸收进入菌体，再经氧化或胞内薛分解形成菌体可利 用的成分，此调细菌的分解代谢。细菌以营养原料及生物氧化产生的能量，合成菌体及相应的代谢产的，此调合成代谢， 细菌在合超和合成代中能产生多种代产物，在细菌的鉴定及生化反应中有实际音义 (一)分解代谢产物的检测 细菌的分解代谢产物因各种细菌具备的酶不完全相同，而有所差异。各代谢产物可通过生化试验的方法检测，通常称为细萄的生化的反 应 1。法代谢测定 (1)糖发醇试验：细菊对各种桔的分解能力及代谢产物不同，可借以鉴别细菌。一般非致病菌能发酵多种单糖，如大肠杆菌能分解萄萄糖 有乳糖，产生甲酸等产物，并有甲酸解氧确，可将其分解为C02和2，故生化反应结果为产酸产气，以“细”表示。伤寒杆菌分解萄萄德产酸。 但无解氧。故生化结果为产酸不产气。以“+”表示。伤童杆萄及 一铅致病菌大都不能分解到，以“”表示 (2)VP试验：大肠杆菌与产气杆均分解萄萄糖 ,为区分两菌可采用VP试验及甲基红试验。产气杆菌能使丙酮酸脱、氧化（在碱性 溶液中)生成二乙，后者可与含基的化合物反应，生成红色化合物，称VP阳性。大肠杆菌分解葡葡德产生丙丽酸，V阴性」 （)甲慕红试验：产气杆菌使丙丽酸脱羧后形成中性产物，培养液H>5,4,甲基红指示剂呈桔黄色，为甲基红试验明性，大肠杆菌分解 萄萄糖产生丙酮酸。 培养液呈酸性pH<5.4,指示剂甲基红呈红色，称甲基红试验(Methyl red e,MR)阳性

3．稳定期（Stationaryphase）:该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大。由于培养基中营养物质消耗、毒性产物 （有机酸、H2O2等）积累PH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋 平衡。细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽胞等。 4．衰亡期（Declinephase）:随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。活菌数与培养时间呈反比关系，此期细菌变长肿 胀或畸形衰变，甚至菌体自溶，难以辩认其形。生理代谢活动趋于停滞。故陈旧培养物上难以鉴别细菌。 体内及自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线。掌握细菌生长规律， 可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。 第三节 细菌的新陈代谢 细菌新陈代谢有两个突出的特点：①代谢活跃。细菌菌体微小，相对表面积很大，因此，物质交换频繁、迅速，呈现十分活跃的代谢。② 代谢类型多样化。各种细菌其营养要求、能量来源、酶系统、代谢产物各不相同，形成多种多样的代谢类型，适应复杂的外界环境。 细菌的代谢通路包括合成与分解两大类。细菌的合成代谢与真核细菌类似，但其分解代谢因细菌酶系统的不同，差异甚大。分解代谢可伴 有ATP及其他形式能量的产生。 一、细菌的能量代谢 细菌代谢所需能量，绝大多数是通过生物氧化作用而获得的。所谓生物氧化即在酶的作用下生物细胞内所发生的系列氧化还原反应。 致病菌获得能量的基质主要是糖类，通过糖的氧化或酵解释放能量，并以高能磷酸键的形式（ADP、ATP）储存能量。 细菌生物氧化的类型分为呼吸与发酵。在生物化过程中，细菌的营养物（如糖）经脱氢酶作用所脱下的氢，需经过一系列中间递氢体（如 辅酶I、辅酶II、黄素蛋白等）的传递转运，最后将氢交给受氢体。以无机物为受氢体的生物氧化过程，称为呼吸，其中以分子氧为受氢体的称 需氧呼吸；而以无机化合物（如硝酸盐、硫酸盐）为受氢体的称厌氧呼吸。生物氧化中以各种有机物为受氢体的称为发酵。大多数病原菌只进 行需氧呼吸或发酵。 1．需氧呼吸（Resperitory）：细菌的呼吸链位于细胞膜上，需氧呼吸伴有氧化磷酸化作用，产生大量能量并以高能磷酸键形式贮存于 ATP中。1分子葡萄糖经三羧酸循环完全氧化后，可产生38个分子ATP以供细菌合成代谢和生长繁殖之用。 2．发酵（Fermentation）:酶系统不完善的细菌，生物氧化过程不彻底，所产生的能量很低。通过无氧发酵，1分子葡萄糖只能产生2分子 ATP，仅为需氧呼吸所产生能量的1/19。专性厌氧菌和兼性厌氧菌都能通过发酵获取能量。 3．细菌的呼吸类型：根据细菌对氧的需要不同，主要分为四类：（1）专性需氧菌（Obligateaerobe）如结核杆菌；（2）专性厌氧菌 (Obligate anaerobe)如破伤风杆菌；（3）兼性厌氧菌(Facultative anaerobe)在有氧或无氧或无氧环境中均能生长，但以有氧时生长较好，大多 数病原菌属此类；（4）微需氧菌(Microaerophilic bacteria)如空肠弯曲菌，宜在低氧压下生长，氧压增高对其有抑制作用。一般细菌在代谢中 需少量的CO2，以提供细菌合成核酸中的嘌呤、嘧啶等。 专性厌氧菌不能呼吸，只能发酵。其原因是：①厌氧菌缺乏细胞色素与细胞色素氧化酶，因此不能氧化那些氧化还原电势较高的氧化型物 质。②厌氧菌缺乏过氧化氢酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase）,不能清除有氧环境下所产生的超氧离子（O2-）和过氧 化氢（H2O2），因而难以存活。③有氧条件下，细菌某些酶的-SH基被氧化为S-S基（如琥珀酸脱氢酶等），从而酶失去活性，使细菌生长受 到抑制。总之，厌氧菌的厌氧原因可有多种因素与机理。 表3-2 细菌的生物氧化与产能 生物氧化类型 受氢体 需氧情况 产生能量（1分子葡萄糖） 需氧呼吸 分子氧 需氧 38个ATP 厌氧呼吸 无机化合物 厌氧 发酵 有机化合物 厌氧 2个ATP 二、细菌的代谢产物 细菌分泌胞外酶将多糖、蛋白质等大分子营养物质分解为单糖、小肽或氨基酸，然后吸收进入菌体，再经氧化或胞内酶分解形成菌体可利 用的成分，此谓细菌的分解代谢。细菌以营养原料及生物氧化产生的能量，合成菌体及相应的代谢产的，此谓合成代谢。 细菌在分解和合成代谢中能产生多种代谢产物，在细菌的鉴定及生化反应中有实际意义。 （一）分解代谢产物的检测 细菌的分解代谢产物因各种细菌具备的酶不完全相同，而有所差异。各代谢产物可通过生化试验的方法检测，通常称为细菌的生化的反 应。 1．糖代谢测定 （1）糖发酵试验：细菌对各种糖的分解能力及代谢产物不同，可借以鉴别细菌。一般非致病菌能发酵多种单糖，如大肠杆菌能分解葡萄糖 有乳糖，产生甲酸等产物，并有甲酸解氢酶，可将其分解为CO2和H2，故生化反应结果为产酸产气，以“⊕”表示。伤寒杆菌分解葡萄糖产酸， 但无解氢酶。故生化结果为产酸不产气，以“+”表示。伤寒杆菌及一般致病菌大都不能分解乳糖，以“-”表示。 （2）VP试验：大肠杆菌与产气杆菌均分解葡萄糖⊕，为区分两菌可采用VP试验及甲基红试验。产气杆菌能使丙酮酸脱羧、氧化（在碱性 溶液中）生成二乙酰，后者可与含胍基的化合物反应，生成红色化合物，称VP阳性。大肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，VP阴性。 （3）甲基红试验：产气杆菌使丙酮酸脱羧后形成中性产物，培养液pH＞5.4，甲基红指示剂呈桔黄色，为甲基红试验阴性，大肠杆菌分解 葡萄糖产生丙酮酸，培养液呈酸性pH＜5.4，指示剂甲基红呈红色，称甲基红试验（Methyl red test,MR）阳性

(4)枸橼酸盐利用试验(Crtest):能利用枸修酸盐作为唯一碳源的细菌如产气杆菌，分解枸修酸盐生成碳酸盐，同时分 解培养基的铵盐生成怎，由此使培养基变为减性，使指示剂澳票香草酚蓝(BTB)由淡绿转为深蓝，此为枸梅酸盐利用试验阳性。、 2.蛋白质代谢测定 (1)引除试验(do:est):含有色氨酸酶的细菌（如大肠杆菌、变形杆菌等）可分解色氨酸生成噪，若加入二甲基氨基苯甲醛，与 哚结合，形成玫瑰引嗓，显红色，称呵引哚试验阳性. (2)硫化氢试验：变形杆菌、乙型副伤寒杆菌等能分解含硫氨基酸如咣氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氢。在有醋酸铅或硫酸亚铁存在时， 则生成黑色硫化铅成硫化亚铁，可借以鉴别细菌， 3.尿素分解试验 变形杆菌具有尿素酶，可分解尿素产生氨，培养基呈碱性，以酚红为指示剂检测呈红色，由此区别于沙门氏菌。 引除()、甲基红(M)、VP(V),构牌酸盐利用(C)四种试验，常用于鉴定肠道杆菌，合称之为MVC试验。大肠杆菌星+…“， 产气杆茵为“…++”. 气相、液相色谱法通过对细菌分解代谢产物中辉发性或不挥发性有机酸和醇类的检测，可准确。快速地确定细菌的种类，是日前进行细菌 生化鉴定的高新技术， (仁)合成代谢产物及临床意义 细菌通过新陈代谢不断合成菌体成分，如多糖。重白质、面肪、核酸。细跑壁及各种辅獰等。此外，细菌还能合成很多在医学上只有重要 置义的代谢产物 1.热原质(Pyrog©)：热原质即菌体中的脂多糖，大多是革兰氏阴性菌产生的。注入人或动物体内能引起发热反应，故名热原质. 热原压耐高热，高压蒸汽灭菌(121℃，20')不能使其破坏，加热(180℃4h:250℃45：650℃1)才使热原质失去作用.热原质可通过 般细菌滤器，但没有挥发性，所以，除去热原质最好的方法是蒸儡。药液、水等被细菌污染后，即使高压灭菌或经滤过除菌仍可有热原质存 在，输注机体后可引起严重发热反应。生物制品或注射液制成后除去热原质比较因堆，所以，必须使用无热原质水制备。 2。毒素与黄：细菌可产生内、外毒素及侵袭性萌，与细萄的致病性密切相关」 内毒素(Endotoxin)即革兰氏阴性菌细跑啦的脂多糖，其毒性成分为类脂人.菌体死亡前解后释放出来。外毒素(Exotoxin)是由革兰氏阳 性菌及少数革兰氏阴性菌在生长代谢过程中释放至菌体外的蛋白质.具有抗原性强、毒性强、作用特异性强的突出特点。 某些细菌可产生具有侵袭性的确，能损伤机体组织，促进细菌的侵袭、扩散，是细菌重要的致病因素，如锁球菌的透明质酸砖等。 3.色素(Pigment):有些细菌能产生色素，对细菌的鉴别有一定意义， 细首色素有两类：©水溶性色素，能弥形至培养基或周围组织，如绿脓杆菌产生的绿脓色素使培养基或脓汗呈绿色。®脂溶性色素，不溶 于水，仅保持在落内使之呈色而培养基颜色不变，如金黄色葡萄球菌色素。细菌色素的产生需一定条件（营养丰富、氧气充足、温度适 宜)，无光合作用，对 4。抗生素（b1)某些微生物代谢过程中可产生一种能抑制或杀死某些其他微生物或综细的物质，称抗生素。抗生素多由放线菌 和真菌产生，细菌仅产生少数几种，如多粘菌素（Poym 种仅作用于有近缘关系的细菌的抗菌物质，称细菌素。细菌素为蛋白类物质，抗菌范困很窄， 无治疗意义但可用于细苗分型和流行病学调查 细菌素以生产菌而命名。大杨杆菌产生的细菌素称大肠菌素 绿脓杆菌产生的称绿脓菌素，霍乱弧菌产生的称弧菌素

（4）枸橼酸盐利用试验（Citrateultiliazation test）:能利用枸橼酸盐作为唯一碳源的细菌如产气杆菌，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，同时分 解培养基的铵盐生成氨，由此使培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝（BTB）由淡绿转为深蓝，此为枸橼酸盐利用试验阳性。、 2．蛋白质代谢测定 （1）吲哚试验（Indoltest）：含有色氨酸酶的细菌（如大肠杆菌、变形杆菌等）可分解色氨酸生成吲哚，若加入二甲基氨基苯甲醛，与吲 哚结合，形成玫瑰吲哚，呈红色，称吲哚试验阳性。 （2）硫化氢试验：变形杆菌、乙型副伤寒杆菌等能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等，生成硫化氢。在有醋酸铅或硫酸亚铁存在时， 则生成黑色硫化铅或硫化亚铁，可借以鉴别细菌。 3．尿素分解试验 变形杆菌具有尿素酶，可分解尿素产生氨，培养基呈碱性，以酚红为指示剂检测呈红色，由此区别于沙门氏菌。 吲哚（I）、甲基红（M）、VP（V）、枸橼酸盐利用（C）四种试验，常用于鉴定肠道杆菌，合称之为IMViC试验。大肠杆菌呈“++--”， 产气杆菌为“--++”。 气相、液相色谱法通过对细菌分解代谢产物中挥发性或不挥发性有机酸和醇类的检测，可准确、快速地确定细菌的种类，是目前进行细菌 生化鉴定的高新技术。 （二）合成代谢产物及临床意义 细菌通过新陈代谢不断合成菌体成分，如多糖、蛋白质、脂肪、核酸、细胞壁及各种辅酶等。此外，细菌还能合成很多在医学上具有重要 意义的代谢产物。 1．热原质（Pyrogen）:热原质即菌体中的脂多糖，大多是革兰氏阴性菌产生的。注入人或动物体内能引起发热反应，故名热原质。 热原质耐高热，高压蒸汽灭菌（121℃，20’）不能使其破坏，加热（180℃4h;250℃45';650℃1'）才使热原质失去作用。热原质可通过一 般细菌滤器，但没有挥发性，所以，除去热原质最好的方法是蒸馏。药液、水等被细菌污染后，即使高压灭菌或经滤过除菌仍可有热原质存 在，输注机体后可引起严重发热反应。生物制品或注射液制成后除去热原质比较困难，所以，必须使用无热原质水制备。 2．毒素与酶：细菌可产生内、外毒素及侵袭性酶，与细菌的致病性密切相关。 内毒素（Endotoxin）即革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖，其毒性成分为类脂A。菌体死亡崩解后释放出来。外毒素(Exotoxin)是由革兰氏阳 性菌及少数革兰氏阴性菌在生长代谢过程中释放至菌体外的蛋白质。具有抗原性强、毒性强、作用特异性强的突出特点。 某些细菌可产生具有侵袭性的酶，能损伤机体组织，促进细菌的侵袭、扩散，是细菌重要的致病因素，如链球菌的透明质酸酶等。 3．色素（Pigment）：有些细菌能产生色素，对细菌的鉴别有一定意义。 细菌色素有两类：①水溶性色素，能弥形至培养基或周围组织，如绿脓杆菌产生的绿脓色素使培养基或脓汗呈绿色。②脂溶性色素，不溶 于水，仅保持在菌落内使之呈色而培养基颜色不变，如金黄色葡萄球菌色素。细菌色素的产生需一定条件（营养丰富、氧气充足、温度适 宜），无光合作用，对细菌的功能尚不清。 4．抗生素（Antibiotic）:某些微生物代谢过程中可产生一种能抑制或杀死某些其他微生物或癌细胞的物质，称抗生素。抗生素多由放线菌 和真菌产生，细菌仅产生少数几种，如多粘菌素（Polymyxin）、杆菌肽(Bicitracin)等。 5．细菌素（Bactericin）:某些细菌能产生一种仅作用于有近缘关系的细菌的抗菌物质，称细菌素。细菌素为蛋白类物质，抗菌范围很窄， 无治疗意义，但可用于细菌分型和流行病学调查。 细菌素以生产菌而命名。大肠杆菌产生的细菌素称大肠菌素，绿脓杆菌产生的称绿脓菌素，霍乱弧菌产生的称弧菌素