海南大学：《生物化学》课程PPT教学课件（生物工程）第十三章 基因工程与蛋白质工程

第十三章 基因工程与蛋白质工程 一、基因工程的定义及主要内容 二、重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴 定 三、克隆基因的表达 四、基因工程的成就和展望 五、蛋白质工程

第十三章 基因工程与蛋白质工程 一、基因工程的定义及主要内容 二、重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴 定 三、克隆基因的表达 四、基因工程的成就和展望 五、蛋白质工程

一、基因工程定义及主要内容  基因工程也称基因重组技术、基因克隆或分 子克隆  是指利用DNA重组技术生产或改造生物产品、 创建或改良动植物品种以及开发特殊用途的 微生物等  是生物工程的重要内容之一 返回

一、基因工程定义及主要内容  基因工程也称基因重组技术、基因克隆或分 子克隆  是指利用DNA重组技术生产或改造生物产品、 创建或改良动植物品种以及开发特殊用途的 微生物等  是生物工程的重要内容之一 返回

 主要步骤： 1.带有目的基因的DNA片段的获得 2、构建DNA重组分子 3、重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定 4、基因的表达 一、基因工程定义及主要内容 返回

 主要步骤： 1.带有目的基因的DNA片段的获得 2、构建DNA重组分子 3、重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定 4、基因的表达 一、基因工程定义及主要内容 返回

返回 基 因 工 程 基 本 程 序 真核染色体DNA 克隆载体 （质粒） 限制酶切割 限制酶切割并 分离所需片断 重组载体 细菌宿主细 胞的转化 细胞分离 培养增值

返回 基 因 工 程 基 本 程 序 真核染色体DNA 克隆载体 （质粒） 限制酶切割 限制酶切割并 分离所需片断 重组载体 细菌宿主细 胞的转化 细胞分离 培养增值

构建DNA重组分子  工具酶  目的基因的制备  克隆载体  DNA分子的体外重组 返回

构建DNA重组分子  工具酶  目的基因的制备  克隆载体  DNA分子的体外重组 返回

工具酶  限制性内切酶是基因工程中最主要的工具酶  DNA连接酶（DNA ligase）、DNA聚合酶 Ⅰ（DNA polymeraseⅠ）、末端转移酶 （terminal transferase）、逆转录酶 （reverse transcriptase）、核酸酶S1 （nuclease S1）和核酸外切酶Ⅶ （exonucleaseⅦ） 返回

工具酶  限制性内切酶是基因工程中最主要的工具酶  DNA连接酶（DNA ligase）、DNA聚合酶 Ⅰ（DNA polymeraseⅠ）、末端转移酶 （terminal transferase）、逆转录酶 （reverse transcriptase）、核酸酶S1 （nuclease S1）和核酸外切酶Ⅶ （exonucleaseⅦ） 返回

限制性核酸内切酶  由Smith在1970年从流感噬血菌中发现  细菌体内有特异的限制修饰系统，这种修饰 系统是通过特殊的修饰酶在细菌本身DNA的 特异识别序列处进行甲基化修饰，从而与外 源DNA相区别。这样，限制性核酸内切酶就 能去切割破坏外源DNA，而对本身无影响。  目前已从原核生物中分离出400～500多种限 制性核酸内切酶

限制性核酸内切酶  由Smith在1970年从流感噬血菌中发现  细菌体内有特异的限制修饰系统，这种修饰 系统是通过特殊的修饰酶在细菌本身DNA的 特异识别序列处进行甲基化修饰，从而与外 源DNA相区别。这样，限制性核酸内切酶就 能去切割破坏外源DNA，而对本身无影响。  目前已从原核生物中分离出400～500多种限 制性核酸内切酶

限制性核酸内切酶  能识别DNA特定核苷酸序列的核酸内切 ➢酶分类:三类. 命名: ➢ 分布：主要来源于原核生物。 ➢ 特点：特异性，即识别特定核苷酸序列， 切割特定切点。 ➢ 结果：产生黏性未端（碱基互补配对）或平 端。 ➢ 举例：大肠杆菌的一种限制酶能识别 GAATTC序列，并在G和A之间切开

限制性核酸内切酶  能识别DNA特定核苷酸序列的核酸内切 ➢酶分类:三类. 命名: ➢ 分布：主要来源于原核生物。 ➢ 特点：特异性，即识别特定核苷酸序列， 切割特定切点。 ➢ 结果：产生黏性未端（碱基互补配对）或平 端。 ➢ 举例：大肠杆菌的一种限制酶能识别 GAATTC序列，并在G和A之间切开

限制性核酸内切酶  限制性内切酶可识别4或6个特异核苷酸序列  粘性末端：指限制性内切酶的切割部位不在 识别序列的中心轴，在断段产生一个短的单 股突伸出来的不齐末端。  钝性末端：指限制性内切酶的切割部位在识 别序列的中心轴处，即产生平齐末端。 返回

限制性核酸内切酶  限制性内切酶可识别4或6个特异核苷酸序列  粘性末端：指限制性内切酶的切割部位不在 识别序列的中心轴，在断段产生一个短的单 股突伸出来的不齐末端。  钝性末端：指限制性内切酶的切割部位在识 别序列的中心轴处，即产生平齐末端。 返回

限制性核酸内切酶  同裂酶:来源不同,但有相同的识别序列.或称 异源同工酶.  同切点酶:不仅识别序列相同,而且切点也相同.  同尾酶:酶的识别序列不完全相同,但切出的粘 性末端相同

限制性核酸内切酶  同裂酶:来源不同,但有相同的识别序列.或称 异源同工酶.  同切点酶:不仅识别序列相同,而且切点也相同.  同尾酶:酶的识别序列不完全相同,但切出的粘 性末端相同