江苏大学：《临床免疫学与免疫检验》课程教学课件（PPT讲稿）第13章 免疫组织化学技术

第十三章 免疫组织化学技术 第一节 免疫组织化学技术概述 一、标本的处理 二、抗原的保存与修复 三、抗体的处理与保存 四、免疫组化的结果判断 五、质量控制

第十三章 免疫组织化学技术 第一节 免疫组织化学技术概述 一、标本的处理 二、抗原的保存与修复 三、抗体的处理与保存 四、免疫组化的结果判断 五、质量控制

第二节 免疫荧光组织化学技术 一、组织处理 二、荧光抗体的标记及染色 第三节 酶免疫组织化学技术 一、组织处理 二、酶标记抗体免疫组化染色 三、非标记抗体免疫酶组化染色 四、酶免疫组化染色中的常用的酶及显色底物 第四节 亲合组织化学染色 一、生物素-亲合素法 二、葡萄球菌A蛋白法 三、凝集素法 四、链霉亲合素-生物素法

第二节 免疫荧光组织化学技术 一、组织处理 二、荧光抗体的标记及染色 第三节 酶免疫组织化学技术 一、组织处理 二、酶标记抗体免疫组化染色 三、非标记抗体免疫酶组化染色 四、酶免疫组化染色中的常用的酶及显色底物 第四节 亲合组织化学染色 一、生物素-亲合素法 二、葡萄球菌A蛋白法 三、凝集素法 四、链霉亲合素-生物素法

第五节 免疫标记电镜技术 一、 免疫标记电镜技术的原理 二、 免疫标记电镜技术的标本制备要求 三、 常用的免疫标记电镜技术 第六节 免疫组织化学技术的应用 一、 免疫组织化学技术的临床应用 二、 免疫组织化学技术的拓展 思考题 小结

第五节 免疫标记电镜技术 一、 免疫标记电镜技术的原理 二、 免疫标记电镜技术的标本制备要求 三、 常用的免疫标记电镜技术 第六节 免疫组织化学技术的应用 一、 免疫组织化学技术的临床应用 二、 免疫组织化学技术的拓展 思考题 小结

免 疫 组 织 化 学 技 术 （ Immunohistochemistry Technique）又称免疫细胞化学技术，是指用标记的特 异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化 学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测 定的一项免疫检测方法

免 疫 组 织 化 学 技 术 （ Immunohistochemistry Technique）又称免疫细胞化学技术，是指用标记的特 异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化 学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测 定的一项免疫检测方法

免疫组织化学的基本过程包括： 1.抗原的提取与纯化； 2.免疫动物或细胞融合，制备特 异性抗体以及抗体的纯化； 3.将标记物与抗体结合形成标记 抗体； 4.标本的处理与制备； 5.抗原抗体免疫学反应以及标记 物呈色反应；6.观察结果。 第一节 免疫组织化学技术概述 根据标记物的性质不同分类： 荧光免疫组织化学技术 酶免疫组织化学技术 免疫金（银）组织化学技术 亲和免疫细胞化学技术 免疫标记电镜技术等

免疫组织化学的基本过程包括： 1.抗原的提取与纯化； 2.免疫动物或细胞融合，制备特 异性抗体以及抗体的纯化； 3.将标记物与抗体结合形成标记 抗体； 4.标本的处理与制备； 5.抗原抗体免疫学反应以及标记 物呈色反应；6.观察结果。 第一节 免疫组织化学技术概述 根据标记物的性质不同分类： 荧光免疫组织化学技术 酶免疫组织化学技术 免疫金（银）组织化学技术 亲和免疫细胞化学技术 免疫标记电镜技术等

标本的类型 组织片标本：活组织检查标本，手术切除标本 细胞片标本：组织印片、铺片、培养的粘附细 胞、体液 、 穿刺液的细胞悬液涂片 一、标 本 的 处 理

标本的类型 组织片标本：活组织检查标本，手术切除标本 细胞片标本：组织印片、铺片、培养的粘附细 胞、体液 、 穿刺液的细胞悬液涂片 一、标 本 的 处 理

标本的固定 ➢ 良好的固定是免疫组织化学结果可靠的重要保证 ➢ 固定的原则：不损伤组织细胞的固有形态、结构、 抗原性和细胞膜的通透性；不干扰固定后的抗原 与抗体的识别与结合 ➢ 固定剂的选择：所有的标本固定必须根据其性质 及所进行的组织化学反应选择适当的固定剂

标本的固定 ➢ 良好的固定是免疫组织化学结果可靠的重要保证 ➢ 固定的原则：不损伤组织细胞的固有形态、结构、 抗原性和细胞膜的通透性；不干扰固定后的抗原 与抗体的识别与结合 ➢ 固定剂的选择：所有的标本固定必须根据其性质 及所进行的组织化学反应选择适当的固定剂

组织切片技术 冰冻切片：较好地保存组织抗原的免疫活性 石蜡切片：形态保存好，可以用于回顾性研究

组织切片技术 冰冻切片：较好地保存组织抗原的免疫活性 石蜡切片：形态保存好，可以用于回顾性研究

二、抗 原 的 保 存 与 修 复 ➢ 抗原修复:免疫组化在制片的过程中由于广泛的蛋白 交联而使其组织的某些抗原决定簇发生遮蔽、致使 免疫细胞化学的信号减弱或消失等不良效应。所以， 使遮蔽的组织抗原决定簇重新暴露的方法，即抗原 修复。 ➢ 常用的方法有： 酶消化法 盐酸水解暴露抗原法 微波炉恢复抗原法 高压锅恢复抗原法 煮沸恢复抗原法

二、抗 原 的 保 存 与 修 复 ➢ 抗原修复:免疫组化在制片的过程中由于广泛的蛋白 交联而使其组织的某些抗原决定簇发生遮蔽、致使 免疫细胞化学的信号减弱或消失等不良效应。所以， 使遮蔽的组织抗原决定簇重新暴露的方法，即抗原 修复。 ➢ 常用的方法有： 酶消化法 盐酸水解暴露抗原法 微波炉恢复抗原法 高压锅恢复抗原法 煮沸恢复抗原法

三、抗 体 的 处 理 与 保 存 抗体的选择 ➢注意选择具有高特异性、稳定的优质抗体 ➢多克隆抗体：敏感性较高、特异性相对较低 ➢单克隆抗体：特异性较高、敏感性相对较低

三、抗 体 的 处 理 与 保 存 抗体的选择 ➢注意选择具有高特异性、稳定的优质抗体 ➢多克隆抗体：敏感性较高、特异性相对较低 ➢单克隆抗体：特异性较高、敏感性相对较低