江苏大学：《临床免疫学与免疫检验》课程教学课件（PPT讲稿）第11章 生物素-亲合素放大技术

第十一章 生物素-亲合 素放大技术

第十一章 生物素-亲合 素放大技术

第二节 亲合素、链霉亲合素的理化性质与标记 一、理化特性 二、亲合素（或链酶亲合素）的标记 第一节 生物素的理化性质与标记 一、活化生物素 二、活化生物素标记蛋白质

第二节 亲合素、链霉亲合素的理化性质与标记 一、理化特性 二、亲合素（或链酶亲合素）的标记 第一节 生物素的理化性质与标记 一、活化生物素 二、活化生物素标记蛋白质

第三节 生物素-亲合素系统的特点 一、灵敏度 二、特异性 三、稳定性 四、适用性 五、其他 思考题 小结 第四节 生物素-亲合素系统的应用 一、生物素-亲合素系统基本类型及原理 二、生物素-亲合素系统在酶免疫测定中的应用 三、生物素-亲合素系统在荧光免疫技术中的应用 四、生物素-亲合素系统在放射免疫测定中的应用 五、生物素-亲合素系统在分子生物学中的应用

第三节 生物素-亲合素系统的特点 一、灵敏度 二、特异性 三、稳定性 四、适用性 五、其他 思考题 小结 第四节 生物素-亲合素系统的应用 一、生物素-亲合素系统基本类型及原理 二、生物素-亲合素系统在酶免疫测定中的应用 三、生物素-亲合素系统在荧光免疫技术中的应用 四、生物素-亲合素系统在放射免疫测定中的应用 五、生物素-亲合素系统在分子生物学中的应用

➢维生素H ➢动、植物组织中广泛 分布,卵黄和肝含量高 ➢MW 244.31kD. ➢I环为咪唑酮环，可与亲合 素结合 ➢Ⅱ环为噻吩环，C2上戊酸 侧链的未端羧基是结合生 物大分子的唯一结构 I 咪唑酮环 Ⅱ 噻吩环 羧基 第一节 生物素理化性质与标记

➢维生素H ➢动、植物组织中广泛 分布,卵黄和肝含量高 ➢MW 244.31kD. ➢I环为咪唑酮环，可与亲合 素结合 ➢Ⅱ环为噻吩环，C2上戊酸 侧链的未端羧基是结合生 物大分子的唯一结构 I 咪唑酮环 Ⅱ 噻吩环 羧基 第一节 生物素理化性质与标记

一、活化生物素 生物素侧链的末 端羧基经化学修 饰后制成带各种 活性基团的衍生 物－活化生物素 (生物素化衍生物)

一、活化生物素 生物素侧链的末 端羧基经化学修 饰后制成带各种 活性基团的衍生 物－活化生物素 (生物素化衍生物)

生物素活化 活化生物素易 与抗原、抗体 酶及核酸分子 中相应基团偶 联形成生物素 化标记物 标记蛋白质氨基的活化生物素 标记蛋白质醛基的活化生物素 标记蛋白质巯基的活化生物素 标记核酸的活化生物素

生物素活化 活化生物素易 与抗原、抗体 酶及核酸分子 中相应基团偶 联形成生物素 化标记物 标记蛋白质氨基的活化生物素 标记蛋白质醛基的活化生物素 标记蛋白质巯基的活化生物素 标记核酸的活化生物素

活化生物素 标记蛋白质氨基的活化生物素 ➢BNHS分子可与蛋白质 赖氨酸的氨基形成肽键 ➢BNHS适用标记抗体和 中性或偏碱性的蛋白质 生物素 N-羟基丁二酰胺 碳二亚胺 生物素羟 基琥珀酰 亚胺酯（ BNHS ） 如何减小空间位阻？ ➢长臂活化生物素（BCNHS）： 生物素和N-羟基丁二酰亚胺之间添 加了两个6-氨基已糖分子基团，形 成连结臂，生物素与大分子基团的 距离

活化生物素 标记蛋白质氨基的活化生物素 ➢BNHS分子可与蛋白质 赖氨酸的氨基形成肽键 ➢BNHS适用标记抗体和 中性或偏碱性的蛋白质 生物素 N-羟基丁二酰胺 碳二亚胺 生物素羟 基琥珀酰 亚胺酯（ BNHS ） 如何减小空间位阻？ ➢长臂活化生物素（BCNHS）： 生物素和N-羟基丁二酰亚胺之间添 加了两个6-氨基已糖分子基团，形 成连结臂，生物素与大分子基团的 距离

标记蛋白质醛基的活化生物素 生物素酰肼(BHZ)：水合肼与生物素的合成物 主要用于标记偏酸性糖蛋白 肼化生物胞素(BCHZ) ：生物素与赖氨酸连接 后，再与无水肼反应而成。 除醛基外， BCHZ还可标记氨基

标记蛋白质醛基的活化生物素 生物素酰肼(BHZ)：水合肼与生物素的合成物 主要用于标记偏酸性糖蛋白 肼化生物胞素(BCHZ) ：生物素与赖氨酸连接 后，再与无水肼反应而成。 除醛基外， BCHZ还可标记氨基

标记蛋白质巯基的活化生物素 马来酰亚胺-丙酰-生物胞素（MPB) 能特异地与蛋白质巯基结合的活化 生物素

标记蛋白质巯基的活化生物素 马来酰亚胺-丙酰-生物胞素（MPB) 能特异地与蛋白质巯基结合的活化 生物素

标记核酸的活化生物素 ➢ 光生物素(photobiotin) 侧链上连接的芳香基叠氮物基团, 经光照后, 变为芳 香 基硝基苯，可直接与腺嘌呤氨基结合, 形成B-核酸探 针

标记核酸的活化生物素 ➢ 光生物素(photobiotin) 侧链上连接的芳香基叠氮物基团, 经光照后, 变为芳 香 基硝基苯，可直接与腺嘌呤氨基结合, 形成B-核酸探 针