江苏大学：《临床免疫学与免疫检验》课程教学课件（PPT讲稿）第7章 放射免疫技术

第七章 放射免疫技术 第一节 放射免疫技术 一、原理及分类 二、常用的放射性核素 三、标记物制备及鉴定 四、抗血清鉴定

第七章 放射免疫技术 第一节 放射免疫技术 一、原理及分类 二、常用的放射性核素 三、标记物制备及鉴定 四、抗血清鉴定

第二节 放射免疫分析 一、基本原理 二、实验方法及测定 第三节 免疫放射分析 一、基本原理 二、IRMA与RIA的比较 思考题 小结

第二节 放射免疫分析 一、基本原理 二、实验方法及测定 第三节 免疫放射分析 一、基本原理 二、IRMA与RIA的比较 思考题 小结

➢免疫技术：以抗原-抗体反应原理为基础，对 样品中相应抗原或抗体进行检测。 ➢标记技术：将可被探测的示踪物质用化学方 法与化合物连接。 ➢标记免疫分析：用可微量或超微量检测的 示踪剂标记抗原、抗体，检测免疫反应结果并确 定待检物。 标记免疫技术－基本概念

➢免疫技术：以抗原-抗体反应原理为基础，对 样品中相应抗原或抗体进行检测。 ➢标记技术：将可被探测的示踪物质用化学方 法与化合物连接。 ➢标记免疫分析：用可微量或超微量检测的 示踪剂标记抗原、抗体，检测免疫反应结果并确 定待检物。 标记免疫技术－基本概念

常见标记免疫技术 ➢放射免疫技术 ➢酶免疫技术 ➢荧光免疫技术

常见标记免疫技术 ➢放射免疫技术 ➢酶免疫技术 ➢荧光免疫技术

第一节 放射免疫技术

第一节 放射免疫技术

早期的放射免疫技术是基于竞争性结合反应原理的 放射免疫分析(RIA)，稍后又发展了非竞争性结合的 免疫放射分析(IRMA)。该类技术具有灵敏度高、特 异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便 且易于标准化等优点，广泛应用于生物医学研究和 临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药 物和肿瘤标志物的定量分析，对相关学科的发展起 到了极大地推动作用

早期的放射免疫技术是基于竞争性结合反应原理的 放射免疫分析(RIA)，稍后又发展了非竞争性结合的 免疫放射分析(IRMA)。该类技术具有灵敏度高、特 异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便 且易于标准化等优点，广泛应用于生物医学研究和 临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药 物和肿瘤标志物的定量分析，对相关学科的发展起 到了极大地推动作用

放射免疫 RIA 以标记抗原与反 应系统中未标记 抗原竞争结合特 异性抗体来测定 待检样品中抗原 量。 免疫放射 IRMA 以过量标记抗体 与抗原非竞争结 合，采用固相免 疫吸附载体分离 游离和结合标记 抗体。 ➢放射受体分析 RRA ➢放射配体结合 分析RBA 其它 一、放射免疫技术－原理及分类

放射免疫 RIA 以标记抗原与反 应系统中未标记 抗原竞争结合特 异性抗体来测定 待检样品中抗原 量。 免疫放射 IRMA 以过量标记抗体 与抗原非竞争结 合，采用固相免 疫吸附载体分离 游离和结合标记 抗体。 ➢放射受体分析 RRA ➢放射配体结合 分析RBA 其它 一、放射免疫技术－原理及分类

二、放射免疫技术－常用的放射性核素 125I 3H 射线 γ β 理化性 活泼 差 核素丰度 >90% － 半衰期 60.2d 12.3y 标记方法 简单 复杂 标记设备 低廉 昂贵 测量条件 简单 复杂 常用标记核素

二、放射免疫技术－常用的放射性核素 125I 3H 射线 γ β 理化性 活泼 差 核素丰度 >90% － 半衰期 60.2d 12.3y 标记方法 简单 复杂 标记设备 低廉 昂贵 测量条件 简单 复杂 常用标记核素

125碘-标记物的制备－标记 125I - 化学或酶促反应，将 放射性负电碘离子氧 化成碘原子或正电碘 离子，通过取代反应 置换被标记物分子中 酪氨酸或酪胺残基以 及组胺残基上的氢原 子。 125I或125I + 125I-标记物 （混合物） Ch-T、 LPO氧化 取代反应 直接标记法 三、放射免疫技术－标记物制备及鉴定

125碘-标记物的制备－标记 125I - 化学或酶促反应，将 放射性负电碘离子氧 化成碘原子或正电碘 离子，通过取代反应 置换被标记物分子中 酪氨酸或酪胺残基以 及组胺残基上的氢原 子。 125I或125I + 125I-标记物 （混合物） Ch-T、 LPO氧化 取代反应 直接标记法 三、放射免疫技术－标记物制备及鉴定

➢使用无还原剂的高 比放射性碘源 ➢被标记物用量要少 ➢ch-T用量要低 ➢控制总反应体积 <200μl ➢反应时间1-2分钟 ➢弱碱性反应条件

➢使用无还原剂的高 比放射性碘源 ➢被标记物用量要少 ➢ch-T用量要低 ➢控制总反应体积 <200μl ➢反应时间1-2分钟 ➢弱碱性反应条件