江苏大学：综合性实验（PPT讲稿）多克隆抗体制备、单克隆抗体的制备、酶标抗体的制备

第一单元 综合性实验 人卫定曲版法

第一单元 综合性实验

实验一多克隆抗体制备 人卫定曲版法

实验一 多克隆抗体制备

多克隆抗体概念 抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由多种抗原决定簇刺 激机体,相应地就活化多个B淋巴细胞克隆,所产生多个单克隆 抗体(McAb)的混合物,此即为多克隆抗体 实验原理 当抗原刺激机体免疫系统,B细胞在T细胞的辅助下(多数 抗原需要T细胞参与),识别抗原的B细胞表位(T细胞识别T细 胞表位)后,T细胞和B细胞均活化,由B细胞针对抗原的B细胞 表位产生的能与抗原B细胞表位结合并发挥生物学功能的兔疫球 蛋白。 人卫定曲版法

抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由多种抗原决定簇刺 激机体，相应地就活化多个B淋巴细胞克隆，所产生多个单克隆 抗体（McAb）的混合物，此即为多克隆抗体。 多克隆抗体概念 当抗原刺激机体免疫系统，B细胞在T细胞的辅助下（多数 抗原需要T细胞参与），识别抗原的B细胞表位（T细胞识别T细 胞表位）后，T细胞和B细胞均活化，由B细胞针对抗原的B细胞 表位产生的能与抗原B细胞表位结合并发挥生物学功能的免疫球 蛋白。 实验原理

实验器材和材料 菌种:伤寒沙门菌O901和伤寒沙门菌H901菌株。 ☆动物:体重在25kg左右的健康青年新西兰家兔。 ◇培养基:细菌普通肉汤培养基、细菌普通固体培养基。 试剂 人G、羊毛脂、石蜡油、注射用卡介苗、二甲 委酸歪里菇:箱3能街李.5%无面石 人氏卫士出版 PEOLESM DEAL PUOLRGN成

❖ 菌种：伤寒沙门菌O901和伤寒沙门菌H901菌株。 ❖ 动物：体重在2.5kg左右的健康青年新西兰家兔。 ❖ 培养基：细菌普通肉汤培养基、细菌普通固体培养基。 ❖ 试剂： 人IgG、羊毛脂、石蜡油、注射用卡介苗、二甲 苯、无菌生理盐水、0.5%无菌甲醛盐水、0.5%无菌石 灰酸盐水、2 % NaN3和3 %戊巴比妥钠等。 实验器材和材料

器械细菌接种环、16号钢质注 头(或7号置置钍 器三通阍阀 5m无 璃腐注 兔子固定 灭菌 烧(20m)和烧杯(200m)、平皿(置径9cm) -500m细菌离心瓶。 ☆仪器:37℃恒 37℃恒温气浴 摇床 低温高速大蓉量离心机(水平转字,室少能滴是5m离心 的离心)。 人卫定曲版法

❖ 器械：细菌接种环、16号钢质注射针头（或7号留置针）、 注射器三通阀、5ml无菌玻璃注射器、兔子固定架，灭菌 三角烧瓶（200 ml）和烧杯（200 ml）、平皿（直径9 cm） 等。 ❖ 其他：酒精棉、脱脂棉、塑料放血管、纱布、800ml细菌 培养用克氏培养瓶，标准麦氏比浊管和50ml圆底进口离心 管或100~500ml细菌离心瓶。 ❖ 仪器：37℃恒温培养箱、37℃恒温气浴（或水浴）摇床、 低温高速大容量离心机（水平转子，至少能满足50ml离心 管的离心）

实验方法 抗颗粒性抗原抗体制备程序 伤寒沙门菌0901、H901 0901、H901菌液 耳缘静脉注射(1×10°/ml) ↓難孟唇驛薑 免疫序第1天第5天第10第15天 免疫剂量0.5m 1.5ml l孟中里永露餐 无菌试验(37℃恒温摇床) 耳正中动脉采血 充袋 量低温高速离 哥心收集细菌 试管凝集试验鉴定 人氏卫士出版 PEOPLESUICALE忘成

抗颗粒性抗原抗体制备程序 实验方法 免疫时序 第1天 第5天 第10天 第15天 第20天 免疫剂量 0.5ml 1ml 1.5ml 2ml 2.5ml 18~24h后，用无菌生 理盐水菌苔洗下接种 伤寒沙门菌O901、H901 18~24h后，分别用无菌0.5%石灰 酸盐水和甲醛生理盐水洗下菌苔 无菌试验（37℃恒温摇床） 大容量低温高速离 心机离心收集细菌 O901、H901菌液 耳缘静脉注射（1×109 /ml ） 耳正中动脉采血 试管凝集试验鉴定

抗可溶性抗原抗体制备程序 弗氏不完全佐剂羊毛脂1份+石腊油5份 Q背部多点速射 免疫时序第周第3周 免疫剂量|1ml, 200ug 混合高压灭菌 耳缘静脉最后耳缘静脉 加強免疫 耳正中动脉 用人IgG与不完全佐剂按 弗氏完全佐剂11体积比加入,卡介苗的 终浓度为1~20mg/ml 耳缘静脉釆血 抗体效价滴定 推成油包水制剂 人卫定曲版法

羊毛脂1份 + 石腊油5份 抗可溶性抗原抗体制备程序 弗氏不完全佐剂 弗氏完全佐剂 混合高压灭菌 用人IgG与不完全佐剂按 1:1体积比加入，卡介苗的 终浓度为1~20 mg/ml。 推成油包水制剂 背部多点注射 免疫时序 第1周 第3周 第4周 第5周 免疫剂量 1ml， 200μg 1ml 100μg 1.5ml 150μg 2ml 200μg 最后耳缘静脉 注射加强免疫 耳缘静脉 耳正中动脉 耳缘静脉采血 1 2 3 4 5 6 抗体效价滴定

注意事项 选择合适的动物种属及品系;良好的抗原质量 和合适的剂量;合理的修饰;适当的佐剂、免疫强 度和免疫途径,有助于提高兔疫效果;动物的健康 状况等。 人卫定曲版法

注意事项 选择合适的动物种属及品系；良好的抗原质量 和合适的剂量；合理的修饰；适当的佐剂、免疫强 度和免疫途径，有助于提高免疫效果；动物的健康 状况等

实验结果分析和讨论 实验结果:观察免疫效果如何? 分析和讨论 实验结果或失败的原因,哪些方面还存在问题? 抗原制备是否达到要求? 佐剂制备的情况? 动物状态? 采血方式? 苏大学邵启弹 人卫定曲版法

实验结果: 观察免疫效果如何？ 分析和讨论： 实验结果或失败的原因，哪些方面还存在问题？ 抗原制备是否达到要求？ 佐剂制备的情况？ 动物状态？ 采血方式？ 江苏大学 邵启祥 实验结果分析和讨论

实验二单克隆抗体的制备 人卫定曲版法

实验二 单克隆抗体的制备