浙江大学医学院：细菌分离培养与常见生化反应

细菌分离培养 与常见生化反应 20190304

细菌分离培养 与常见生化反应 20190304

本次实验解决三个问题 1:培养细菌一如何培养一株纯种细菌? 2:寻找细菌-细菌分布在哪里? 3:鉴别细菌--不同细菌的生化反应能力不同

1：培养细菌---如何培养一株纯种细菌? 2：寻找细菌----细菌分布在哪里？ 3：鉴别细菌----不同细菌的生化反应能力不同 本次实验解决三个问题

如何培养一株纯种细菌? 讨论:细菌的生长条件 实验室培养-无菌操作 细菌接种方法 菌种鉴定:生化反应

如何培养一株纯种细菌? • 讨论: 细菌的生长条件 • 实验室培养---无菌操作 ---细菌接种方法 ---菌种鉴定: 生化反应

细菌的生长条件--培养基 (1)水分人工培养细菌应用蒸馏水、无离子水 (2)含碳化合物葡萄糖、乳糖、蔗糖及麦芽糖。 (3)含氮化合物蛋白胨、氨基酸及尿素等 (4)矿物质 常用氯化钠,其次磷酸氢二钾等。 (5)生长因子动物血清、酵母浸出物等

细菌的生长条件---培养基 （1）水分 人工培养细菌应用蒸馏水、无离子水。 （2）含碳化合物 葡萄糖、乳糖、蔗糖及麦芽糖。 （3）含氮化合物 蛋白胨、氨基酸及尿素等。 （4）矿物质 常用氯化钠，其次磷酸氢二钾等。 （5）生长因子 动物血清、酵母浸出物等

细菌的生长条件--气体环境 根据细菌呼吸对氧的需要程度分: (1)专性需氧菌 (2)专性厌氧菌-破伤风梭菌等 缺少完善的呼吸酶系统 厌氧培养箱 螺旋柄 气圈 (3)微需氧菌 橡胶片 颗粒催化剂 (4)兼性厌氧菌 催化剂盛器 氢气袋 培养皿 厌氧指示剂

细菌的生长条件---气体环境 根据细菌呼吸对氧的需要程度分： （1）专性需氧菌 （2）专性厌氧菌---破伤风梭菌等 ---缺少完善的呼吸酶系统 ---厌氧培养箱 （3）微需氧菌 （4）兼性厌氧菌

tension W Aerobic Microaerophilic Facultative Aerotolerant Anaerobic (top growth)(growth just anaerobic anaerobic(bottom below surface) (growth (some growth growth) nout) in O2)

细菌的生长条件-温度等 适宜的温度 超嗜热菌 嗜热菌 嗜温菌 合适的酸碱度:多数病原菌* 最适PH为中性或弱碱性( pH72~7.6)(真菌,结核杆 菌,霍乱弧菌) 10 0102030405060708090100110t ·渗透压

细菌的生长条件---温度等 • 适宜的温度 • 合适的酸碱度：多数病原菌 最适PH为中性或弱碱性（ pH7.2～7.6）( 真菌,结核杆 菌,霍乱弧菌) • 渗透压

肖毒与灭菌 消毒( disinfection) 采用较为温和的理化因素杀死大部分病原微生物的 过程,并不一定能杀死含芽孢的细菌和一些非病原 微生物。 灭菌( sterilization) 采用强烈的理化因素杀死物体表面以及内部所有微 生物的方法。包括杀死病原和非病原微生物,繁殖 体和芽孢等,从而达到无菌的状态

消毒与灭菌 消毒（disinfection) ---采用较为温和的理化因素杀死大部分病原微生物的 过程，并不一定能杀死含芽孢的细菌和一些非病原 微生物。 灭菌（sterilization) ---采用强烈的理化因素杀死物体表面以及内部所有微 生物的方法。包括杀死病原和非病原微生物，繁殖 体和芽孢等，从而达到无菌的状态

常用化学方法 常用物理方法 化学消毒剂:含氯消 ·干热灭菌法-火焰灼烧,干 毒剂,醇类(75%乙 烤箱(160/2-4h) 醇消毒效果最好) 湿热灭菌法-高压蒸汽灭菌 碘伏 锅(115℃/30min;121 /20min),煮沸灭菌,低 熏蒸或喷雾消毒:过 温间歇灭菌等 氧乙酸、过氧化氢、 滤过除菌法-0.22Wm孔径 甲醛喷雾消毒 滤膜 ·射线灭菌法-紫外杀菌

常用化学方法 • 化学消毒剂：含氯消 毒剂，醇类（75%乙 醇消毒效果最好）， 碘伏 • 熏蒸或喷雾消毒：过 氧乙酸、过氧化氢、 甲醛喷雾消毒 常用物理方法 • 干热灭菌法---火焰灼烧，干 烤箱（160℃/2-4h) • 湿热灭菌法---高压蒸汽灭菌 锅（115 ℃ /30min；121 ℃ /20min） ，煮沸灭菌，低 温间歇灭菌等 • 滤过除菌法---0.22μm孔径 滤膜 • 射线灭菌法---紫外杀菌

无菌操作 概 指在无菌室或超净台中进行以防止微生物进入人 体或污染供试菌的操作技术。无菌操作是各种生 物实验和生产实践中一项重要的基本操作 目的 保证无菌区域样本或物品不被污染

无菌操作 • 概念 ---指在无菌室或超净台中进行以防止微生物进入人 体或污染供试菌的操作技术。无菌操作是各种生 物实验和生产实践中一项重要的基本操作。 • 目的 ---保证无菌区域样本或物品不被污染