河南科技学院：《微生物学》课程教学资源（PPT课件）微生物学实验（讲稿，主讲：王振河）.ppt_大学文库

微生物学实验王振河

实验一细菌的单染色及油镜的使用 ◆实验目的 ◆实验原理 ◆实验材料 ◆实验步骤 ◆实验结果 ◆问题与讨论

一、实验目的 ◆学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技术及维护的基本知识 ◆学习微生物涂片、单染色的基本技术 ◆初步认识细菌的形态特征， ◆学习简单的无菌操作技术

二、实验原理1 ◆显微镜的构造 1.光学部分:目镜、物镜、照明装置(聚光镜、虹彩光圈、反光镜等)。它使检视物放大,生成物象。 2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件.它起着支持调节固定等作用

图1-1-2 光学显微镜的成像原理倒立的虚像

◆显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数：物镜放大倍数×目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率:是表示显微镜辨析两点之间距离的能力。可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ：镜口角（即入射角）。 D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰

◆油镜使用的原理油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 ◆ 根据公式D=λ/2n·sin(α/2 ) ，增大分母，使得D值减小，分辨率增大

1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。显微镜保养和使用中的注意事项

油镜的使用 ◆待后边演示

二、实验原理2 ◆细菌的单染色细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。染色前必须固定细菌，其目的是：一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态