齐鲁师范学院（山东教育学院）：《微生物学》课程教学课件（PPT讲稿）实验指导三 细菌的单染色法

实验技术三 细菌的单染色法 一、实验目的 ➢ 学习微生物涂片、染色的基本技术； ➢掌握细菌的单染色法； ➢初步学会无菌操作技术； ➢巩固显微镜油镜的使用方法

实验技术三 细菌的单染色法 一、实验目的 ➢ 学习微生物涂片、染色的基本技术； ➢掌握细菌的单染色法； ➢初步学会无菌操作技术； ➢巩固显微镜油镜的使用方法

二、基本原理 ➢ 细菌体积微小，较透明，未经染色不易识别, 借助于染色法可使细菌着色，与背景形成鲜 明的对比，易于在显微镜下观察。 ➢ 单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的 方法。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长 于中性、碱性或酸性溶液中时常带负电荷， 故易于与碱性染料结合，使其着色

二、基本原理 ➢ 细菌体积微小，较透明，未经染色不易识别, 借助于染色法可使细菌着色，与背景形成鲜 明的对比，易于在显微镜下观察。 ➢ 单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的 方法。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长 于中性、碱性或酸性溶液中时常带负电荷， 故易于与碱性染料结合，使其着色

三、实验器材 ➢ 菌种 ➢ 试剂 ➢ 其他器材 枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 生理盐水、吕氏碱性美兰染液、齐氏复红染液 或草酸铵结晶 紫染液 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶、擦镜纸等

三、实验器材 ➢ 菌种 ➢ 试剂 ➢ 其他器材 枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 生理盐水、吕氏碱性美兰染液、齐氏复红染液 或草酸铵结晶 紫染液 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶、擦镜纸等

四、操作步骤 载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌 不宜过多；涂片要均匀，不宜过厚 热固定温度不宜过高（以玻片与手背 接触感到不烫手为宜），否则会改变 甚至破坏细胞形态 以染液刚好覆盖 涂片薄膜为宜 水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水 从载玻片的一端流下。水流不宜过急、 过大，以免涂片薄膜脱落。 吸水纸吸净或吹风机吹干 涂片 干燥与固定 染色 水洗 干燥 镜检

四、操作步骤 载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌 不宜过多；涂片要均匀，不宜过厚 热固定温度不宜过高（以玻片与手背 接触感到不烫手为宜），否则会改变 甚至破坏细胞形态 以染液刚好覆盖 涂片薄膜为宜 水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水 从载玻片的一端流下。水流不宜过急、 过大，以免涂片薄膜脱落。 吸水纸吸净或吹风机吹干 涂片 干燥与固定 染色 水洗 干燥 镜检

思 考 题 1. 你认为制备细菌染色标本时，尤其应 该注意哪些环节？ 2. 为什么要求制片完全干燥后才能用油 镜观察? 3. 如果你的涂片未经热固定，将会出现 什么问题?如果加热温度过高、 时间 太长，又会怎么样呢？

思 考 题 1. 你认为制备细菌染色标本时，尤其应 该注意哪些环节？ 2. 为什么要求制片完全干燥后才能用油 镜观察? 3. 如果你的涂片未经热固定，将会出现 什么问题?如果加热温度过高、 时间 太长，又会怎么样呢？