《临床免疫学检验技术》课程教学课件（讲稿）荧光免疫技术

第八章荧光免疫技术

第八章 荧光免疫技术

标记免疫技术生物素固相膜放射荧光酶化学发光亲和素免疫分析免疫技术免疫技术免疫技术免疫技术技术放大技术

标记 免疫 技术 放射 免疫技术 生物素 亲和素 放大技术 固相膜 免疫分析 技术 化学发光 免疫技术 酶 免疫技术 荧光 免疫技术

本章内容概要第一节荧光免疫试验的组成要素一、安荧光及荧光物质基础知识二、荧光显微镜三、荧光素-抗体结合物第二节间接免疫荧光试验一、基本原理二、实验方法三、注意事项

第一节 荧光免疫试验的组成要素 一、荧光及荧光物质基础知识 二、荧光显微镜 三、荧光素-抗体结合物 第二节 间接免疫荧光试验 一、基本原理 二、实验方法 三、注意事项 本章内容概要

本章内容概要第四节其他与荧光检测相关的免疫试验一、时间分辨荧光免疫试验二、荧光偏振免疫试验第五节荧光免疫试验的临床应用一、间接荧光免疫试验二、其他荧光免疫试验第六节影响荧光免疫试验的主要因素一、荧光素结合物二、待检标本三、其他

第四节 其他与荧光检测相关的免疫试验 一、时间分辨荧光免疫试验 二、荧光偏振免疫试验 第五节 荧光免疫试验的临床应用 一、间接荧光免疫试验 二、其他荧光免疫试验 第六节 影响荧光免疫试验的主要因素 一、荧光素结合物 二、待检标本 三、其他 本章内容概要

教学要求掌握：荧光显微镜技术的主要类型。荧光效率、荧光猝灭、荧光偏振、荧光寿命、激发光谱、荧光抗体的概念，间接免疫荧光试验的基本原理、荧光免疫试验的主要影响因素。熟悉：荧光显微镜技术的临床应用：时间分辨荧光免疫测定的原理及方法类型。了解：荧光偏振免疫测定的原理及方法学评价：荧光免疫测定的应用

教学要求 掌握：荧光显微镜技术的主要类型。荧光效率、 荧光猝灭、荧光偏振、荧光寿命、激发光谱、 荧光抗体的概念，间接免疫荧光试验的基本原 理、荧光免疫试验的主要影响因素。 熟悉：荧光显微镜技术的临床应用；时间分辨荧 光免疫测定的原理及方法类型。 了解：荧光偏振免疫测定的原理及方法学评价； 荧光免疫测定的应用

第一节荧光免疫试验的组成要素荧光免疫试验（fluoroimmunoassay）：将抗原抗体反应与荧光技术相结合而建立的一种免疫标记技术，具有高度特异性、敏感性和直观性，对待测物进行定位、定性和定量分析。心最早出现的免疫标记技术；*1941年，CoonS，用FITC标记肺炎链球菌抗体*1958年，Riggs，改良FITC;*1960年，Glodstein，改良荧光抗体的纯化。AlbertHewettCoons（19121978）

荧光免疫试验（fluoroimmunoassay）：将抗原抗体反应 与荧光技术相结合而建立的一种免疫标记技术，具有高度特异 性、敏感性和直观性，对待测物进行定位、定性和定量分析。 ❖ 最早出现的免疫标记技术； ❖ 1941年，Coons，用FITC标记肺炎链球菌抗体； ❖ 1958年，Riggs，改良FITC； ❖ 1960年，Glodstein,改良荧光抗体的纯化。 第一节 荧光免疫试验的组成要素

FiuoresceinIsothiocyanate (FiTC)UyLight490nmGreenLight.517nm(longerwavelength)Antibodyexcitinglightemittedlight2E2

荧光免疫技术的分类1.荧光抗体技术（fluorenscenceantibodytechniqueFAT）：荧光素标记抗体对抗原进行定位染色，显微镜下观察荧光染色形态，判断是否存在相应抗原。2.荧光免疫分析（fluorescenceimmunoassay）：对液体中的抗原、抗体进行自动化定量分析，包括时间分辨荧光免疫测定、荧光偏振免疫测定、荧光酶免疫测定

荧光免疫技术的分类 1. 荧光抗体技术（fluorenscence antibody technique, FAT）：荧光素标记抗体对抗原进行定位染色，显微 镜下观察荧光染色形态，判断是否存在相应抗原。 2. 荧光免疫分析（fluorescence immunoassay）：对液体 中的抗原、抗体进行自动化定量分析，包括时间分辨 荧光免疫测定、荧光偏振免疫测定、荧光酶免疫测定

荧光及荧光物质基础知识一、释放能量激发态电子可见光（荧光）400800nm紫外光250-400mm激发光电子荧光（fluorescence）荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃迁到激发态，当其回复至基态时，以发射光形式释放出能量，称为荧光

一、荧光及荧光物质基础知识 荧光（fluorescence） 荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃 迁到激发态，当其回复至基态时，以发射光形式 释放出能量，称为荧光

（一）荧光的基本知识80发射英光光诺1.发射光谱是指固定激50潮光光浴机对荧光强发波长，在不同波长下记0录的标本发射荧光的谱图度皮030!600400700500长（nm）

（一）荧光的基本知识 1.发射光谱是指固定激 发波长，在不同波长下记 录的标本发射荧光的谱图