《临床免疫学检验技术》课程教学课件（PPT讲稿）实验五 免疫印迹试验（免疫印迹法——检测ANA谱）

实验五免疫印迹试验免疫印迹法 - 检测ANA谱

实验五 免疫印迹试验 免疫印迹法 –检测ANA谱

一、实验目的及要求掌握：免疫印迹法检测ANA谱的原理及结果判定熟悉：免疫印迹法检测ANA谱的操作及注意事项了解：ANA谱检测的临床意义

掌握：免疫印迹法检测ANA谱的原理及结果判定 熟悉：免疫印迹法检测ANA谱的操作及注意事项 了解： ANA谱检测的临床意义 一、实验目的及要求

二、概念1.SDS-PAGE:十二烷基硫酸钠--聚丙烯酰胺凝胶2.NC:硝酸纤维素3.ANA:是以真核细胞成分为靶抗原的自身抗体的总称。4.自身抗体:因自身免疫系统紊乱而产生的针对自身组织器官、细胞及细胞内成分的抗体

二、概念 1. SDS-PAGE:十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶. 2. NC: 硝酸纤维素. 3. ANA:是以真核细胞成分为靶抗原的自身抗体 的总称。 4.自身抗体:因自身免疫系统紊乱而产生的针对自 身组织器官、细胞及细胞内成分的抗体

5.免疫印迹技术(immunoblottingtechnique):是凝胶电泳与固相免疫相结合的一种复合免疫技术.是生物大分子物质核酸或蛋白质)通过不同的途径转移到固相载体上然后与相应的探针发生化学或免疫学反应,显示谱带用来分析DNA的称Southernblot，分析RNA的称为Northernblot，分析蛋白质的称Westernblot

5. 免疫印迹技术 (immunoblotting technique):是凝胶电泳与固相 免疫相结合的一种复合免疫技术.是生物大分子物质 (核酸或蛋白质)通过不同的途径转移到固相载体上, 然后与相应的探针发生化学或免疫学反应,显示谱带. 用来分析DNA的称Southern blot, 分析RNA的称为 Northern blot, 分析蛋白质的称Western blot

三、实验原理（动画演示）先将各种细胞核组分进行SDS－PAGE电泳，使各种抗原组分按分子量大小分离后转移至NC膜上。待测血清中的特异性IgG抗体与印迹膜上的抗原结合形成免疫复合物,加入酶标抗人IgG抗体作为示踪二抗，与复合物中的特异性IgG结合，形成膜条抗原－特异性IgG－酶标抗人IgG抗体复合,加入底物，使区带显色。根据膜上显色区带的位置，参比ANA标准带图谱即可判断有无某种ANA。ldiaoy002

三、实验原理 (动画演示) 先将各种细胞核组分进行SDS－PAGE电泳，使 各种抗原组分按分子量大小分离后转移至NC膜上。 待测血清中的特异性IgG抗体与印迹膜上的抗原结合 形成免疫复合物,加入酶标抗人IgG抗体作为示踪二抗， 与复合物中的特异性IgG结合，形成膜条抗原－特异 性IgG－酶标抗人IgG抗体复合,加入底物，使区带显 色。根据膜上显色区带的位置，参比ANA标准带图谱， 即可判断有无某种ANA

酵标标本底物抗原抗抗体（含抗体）44EY444硝酸纤维索膜AA金福鱼bbioo.com原理示意图

原理示意图

四、器材乌试剂1.抗核抗体谱IgG检测试剂盒包括：包被多种细胞核抗原的NC膜条、酶结合物(碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG抗体)、样本缓冲液、浓缩清洗液、底物(四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-3-哚-磷酸盐)、温育盘、阳性对照、ANA标准带结果判定模板等。有商品供应

四、器材与试剂 1.抗核抗体谱IgG检测试剂盒 包括:包被多种细胞核抗原的NC膜条、酶结合物(碱 性磷酸酶标记的羊抗人IgG抗体)、样本缓冲液、浓 缩清洗液、底物(四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-3- 吲哚-磷酸盐)、温育盘、阳性对照、ANA标准带结 果判定模板等。有商品供应

抗核抗体谱试剂盒成分：1、NC膜条（16条）2、酶结合物3、样本缓冲液4、浓缩清洗缓冲液5、底物6、温育盘、7.阳性对照

抗核抗体谱试剂盒 成分： 1、NC膜条（16条） 2、酶结合物 3、样本缓冲液 4、浓缩清洗缓冲液 5、底物 6、温育盘、 7、阳性对照

3FEF1包被抗原的检测膜清洗缓冲液酶结合物条10倍浓缩ALP标记的羊抗人IgG

包被抗原的检测膜 条 清洗缓冲液 酶结合物 10倍浓缩 ALP标记的羊抗人IgG

EUROIMMUNSLRSTHATE]nD17107ACN01-04-0底物液阳性对照样本缓冲液四唑硝基苯胺兰/BCIP直接使用直接使用

阳性对照 底物液 样本缓冲液 四唑硝基苯胺兰/BCIP 直接使用 直接使用