动物医学实验课件（PPT讲稿）中兽医学实验八 中药体外抑菌试验

中药药理实验

中药药理实验

实验八中药体外抑菌试验目的要求通过平板打孔法，学习重要体外抑菌实验的方法，了解清热药的抑菌和杀菌作用。二、实验提要1、灭菌（杀菌，Sterilization）：用物理或化学方法将所有致病菌和非致病菌的微生物、细菌的芽孢全部杀死的操作。物理灭菌法包括干热灭菌法、湿热灭菌法、紫外线灭菌、辐射灭菌和微波灭菌。其中干热灭菌法包括火焰灼烧和干热空气灭菌，湿热灭菌法包括常温灭菌（巴氏灭菌煮沸灭菌和低温间歇灭菌）以及加压灭菌（常规加压灭菌和连续加压灭菌）。化学灭菌包括液体擦拭灭菌和气体熏蒸灭菌防腐（抑菌，Antisepsis）：系指用物理或化学方法防止和抑制微生物的生长繁殖的操作

实验八 中药体外抑菌试验 一、目的要求 通过平板打孔法，学习重要体外抑菌实验的方法，了解清 热药的抑菌和杀菌作用。 防腐（抑菌，Antisepsis）：系指用物理或化学方法防 止和抑制微生物的生长繁殖的操作。 二、实验提要 1、灭菌（杀菌，Sterilization）：用物理或化学方法将 所有致病菌和非致病菌的微生物、细菌的芽孢全部杀死的 操作。 物理灭菌法包括干热灭菌法、湿热灭菌法、紫外线灭 菌、辐射灭菌和微波灭菌。其中干热灭菌法包括火焰灼烧 和干热空气灭菌，湿热灭菌法包括常温灭菌（巴氏灭菌、 煮沸灭菌和低温间歇灭菌）以及加压灭菌（常规加压灭菌 和连续加压灭菌）。 化学灭菌包括液体擦拭灭菌和气体熏蒸灭菌

DNA鞭毛细胞质英膜细胞壁细胞膜各种灭菌的方法主要都是通过破坏构成微生物生命结构的物质，导致核酸被破坏，蛋白质变性或凝固，酶的失活，从而使微生物死亡

各种灭菌的方法主要都是通过破坏构成微生物生命结构 的物质，导致核酸被破坏，蛋白质变性或凝固，酶的失 活，从而使微生物死亡

2、清热药指药性寒凉，以清解里热为主要作用的中药分为清热泻火药、清热燥湿药、清热凉血药、清热解毒药清热解暑药、清虚热药。临床上，部分清热药除具有清热作用外，还具有抗菌、抗病毒、保肝、抗炎、抗过敏、调节免疫力、抗肿瘤等效果。公

2、清热药指药性寒凉，以清解里热为主要作用的中药。 分为清热泻火药、清热燥湿药、清热凉血药、清热解毒药、 清热解暑药、清虚热药。临床上，部分清热药除具有清热 作用外，还具有抗菌、抗病毒、保肝、抗炎、抗过敏、调 节免疫力、抗肿瘤等效果

本次试验使用的中药，黄连的抑菌成分为生物碱，黄芩的主要成分为黄酮苷，黄柏的主要成分为生物碱，虎杖的主要成分为葱苷和二苯乙烯苷，诃子的主要成分为有机酸和质，大蒜、葱、姜的主要成分为挥发油。COOHHOofOHglu-oOHHOCH3OHHOCH=CHO

本次试验使用的中药，黄连的抑菌成分为生物碱，黄芩 的主要成分为黄酮苷，黄柏的主要成分为生物碱，虎杖的 主要成分为蒽醌苷和二苯乙烯苷，诃子的主要成分为有机 酸和鞣质，大蒜、葱、姜的主要成分为挥发油

3、实验方法3.1试管法取试管8支，每只试管均加入1mL培养基，第1只试管加入1mL中药提取液（浓度每毫升提取液相当于原药材1g），混匀，自第2管起，每管加入前一管中吸取的混合液1mL混匀，第8管的混合液中吸出1mL弃之。各试管加入100uL供试菌悬液。同时设药液（各稀释度药液各1管）；细菌（细菌与培养基0.1：1）；培养基（不加药液与菌液）各一管，做为对照。将上述试管摇匀后，置于37℃恒温箱中培养24h，再观察结果。如试管浑浊不明显，则各试管吸取药液10uL转移至琼脂平板培养基中涂布培养24h，观察菌落的生长情况

3、实验方法 3.1 试管法 取试管 8 支，每只试管均加入1mL培养基，第1只试管 加入1mL中药提取液（浓度每毫升提取液相当于原药材 1g），混匀，自第 2 管起，每管加入前一管中吸取的混 合液1mL混匀，第 8 管的混合液中吸出 1mL弃之。各试 管加入100μL供试菌悬液。同时设药液（各稀释度药液各 1管）；细菌（细菌与培养基0.1：1）；培养基（不加药 液与菌液）各一管，做为对照。将上述试管摇匀后，置于 37℃ 恒温箱中培养24h，再观察结果。如试管浑浊不明 显，则各试管吸取药液10μL转移至琼脂平板培养基中， 涂布培养24h，观察菌落的生长情况

试管编号.10药液2ml久服奔去一弄去2mlm药液2ml肉汤培养基2ml0.10.10.10.10.10.1010.10n01黑液（ml）1:161:641:81:321:1281:2561:3121:21:41:2药液桶释度中物培养盗16-24h37°℃珞养条件培养结果图7-3以试管内药液逐级稀释法测定药物的抑菌效价示例注：“+”表示有细菌生长，“”表示无细菌生长。在本次试验中，药物的抑菌效价为！：32

3、实验方法3.2平板法3.2.1非挥发性中药抑菌试验取已制备好的普通琼脂平板，吸取100uL供试菌悬液于其中，用"L"棒涂匀，然后用直径5mm的吸管在每个培养基平板上均匀的打5个孔，在火焰上稍加热封底后，各孔分别加入一定浓度的各预试中药药液25uL，并设定空白组。重复2次，最后将平板放入37℃温箱，培养24h，观并测量抑菌圈直径培养时，注意培养Ⅲ盖子在上面。3.2.3挥发性中药抑菌试验在普通琼脂平板的盖上的中央加一无菌倒置的青霉素瓶盖并用凡士林固定。用移液器吸取稀释好的菌液滴于普通琼脂平板上（约0.1mL），用无菌"L”形玻棒将菌液抹匀。取大蒜泥少许，加入已经固定的青霉素瓶盖凹陷内，然后将已涂布菌液的琼脂培养基倒置于盛有大蒜汁的培养血盖上，切勿与或青霉素盖相接触。放入37℃培养24h，观察抑菌效果。同时以清水设定空白试验。培养时，培养血盖子在下面

3、实验方法 3.2 平板法 3.2.1 非挥发性中药抑菌试验 取已制备好的普通琼脂平板，吸取 100μL 供试菌悬液于其中， 用“L”棒涂匀，然后用直径 5 mm的吸管在每个培养基平板 上均匀的打 5 个孔，在火焰上稍加热封底后，各孔分别加入一 定浓度的各预试中药药液 25μL，并设定空白组。重复2次，最 后将平板放入37℃ 温箱，培养 24 h，观并测量抑菌圈直径。 培养时，注意培养皿盖子在上面。 3.2.3 挥发性中药抑菌试验 在普通琼脂平板的盖上的中央加一无菌倒置的青霉素瓶盖， 并用凡士林固定。用移液器吸取稀释好的菌液滴于普通琼脂平 板上（约 0.1mL），用无菌“L”形玻棒将菌液抹匀。取大蒜 泥少许，加入已经固定的青霉素瓶盖凹陷内，然后将已涂布菌 液的琼脂培养基倒置于盛有大蒜汁的培养皿盖上，切勿与或青 霉素盖相接触。放入 37℃ 培养 24h，观察抑菌效果。同时以 清水设定空白试验。培养时，培养皿盖子在下面

OoOO6O图7-1用平血内杯管法或挖孔法或贴纸片法筛选抗菌药物内圈为杯管或挖孔或纸片，外圈为抑菌圈

四、实验结果记录各组产生抑菌圈的直径，分析各种中药的抑菌效果。五、注意事项1、所有试验所用菌液、接触菌液的枪头、培养基均应收集到75%乙醇烧杯中，最后集中灭菌处理：2、接菌时平板盖不要完全开，避免空气中杂菌污染；3、涂布时，要等涂布棒稍冷再涂布，涂布要均匀；吸取细菌时，要将菌液摇匀。4、火焰封底时，注意不要加热时间过久；5、打孔加药时注意不要使供试品药液溢出培养基孔。加药后，用记号笔在平板底部做标记，不能标在平板盖上；6、操作时，尽可能靠近酒精灯操作，减小杂菌的污染

四、实验结果 记录各组产生抑菌圈的直径，分析各种中药的抑菌效果。 五、注意事项 1、所有试验所用菌液、接触菌液的枪头、培养基均应收集 到75%乙醇烧杯中，最后集中灭菌处理； 2、接菌时平板盖不要完全敞开，避免空气中杂菌污染； 3、涂布时，要等涂布棒稍冷再涂布，涂布要均匀；吸取细 菌时，要将菌液摇匀。 4、火焰封底时，注意不要加热时间过久； 5、打孔加药时注意不要使供试品药液溢出培养基孔。加药 后，用记号笔在平板底部做标记，不能标在平板盖上； 6、操作时，尽可能靠近酒精灯操作，减小杂菌的污染