南京农业大学：动物医学实验课件（PPT讲稿）霉菌的检查

CTRAL霉菌的检查刘云欢副教授

1 霉菌的检查 刘云欢 副教授

实验目的和要求了解和认识常见霉菌的基本形态特征■理解霉菌检查中染色的原理】掌握观察霉菌形态的基本方法及霉菌检查的临床意义2

实验目的和要求 ◼ 了解和认识常见霉菌的基本形态特征 ◼ 理解霉菌检查中染色的原理 ◼ 掌握观察霉菌形态的基本方法及霉菌检查的临床意义 2

实验材料R■菌种：根霉（Rhizopussp.）、毛霉（Mucorsp.）、曲霉（Aspergillus sp.）、青霉（Penicilliumsp.）的平板培养物。■培养基：土豆琼脂培养基（PDA）或察氏培养基。溶液或试剂：乳酸石炭酸棉蓝染色液。■其他：无菌吸管，平血，载玻片，盖玻片，解剖针，镊子，20%甘油，显微镜

实验材料 ◼ 菌种：根霉（Rhizopus sp.）、毛霉（Mucor sp.） 、曲霉（Aspergillus sp.）、青霉（Penicillium sp. ）的平板培养物。 ◼ 培养基：土豆琼脂培养基（PDA）或察氏培养基。 ◼ 溶液或试剂：乳酸石炭酸棉蓝染色液。 ◼ 其他：无菌吸管，平皿，载玻片，盖玻片，解剖针， 镊子，20%甘油，显微镜

原理■霉菌菌丝比较粗大（菌丝和孢子的直径达到3～10μm），常是细菌菌体宽度的几倍至几干倍，因而可用低倍、高倍镜观察。霉菌菌丝细胞容易收缩变形，抱子容易飞扬，在制备霉菌标本时，常用乳酸石炭酸溶液作为介质。乳酸石炭酸溶液具有不使细胞变形，可杀菌防腐，不易干燥，能保持较长时间等优点。若加入棉蓝，又具有一定的染色效果

原理 ◼ 霉菌菌丝比较粗大（菌丝和孢子的直径达到3～10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因而可用低 倍、高倍镜观察。霉菌菌丝细胞容易收缩变形，孢子 容易飞扬，在制备霉菌标本时，常用乳酸石炭酸溶液 作为介质。乳酸石炭酸溶液具有不使细胞变形，可杀 菌防腐，不易干燥，能保持较长时间等优点。若加入 棉蓝，又具有一定的染色效果。 4

方法及操作■点种培养：用接种针沾取斜面少许孢子在无菌的察氏培养基中央穿刺接种（倒置培养皿穿刺接种），30℃下培养7～10d，形成巨大菌落培养物。■直接制片：于洁净载玻片中央加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，打开霉菌平板培养物，用解针从菌落的边缘挑取少量带有孢子的菌丝，放入载玻片的染液中，细心地把菌丝挑散开，加盖玻片，注意不要产生气泡，置于显微镜下观察，菌丝呈兰色，颜色的深度随菌龄的增加而减弱

方法及操作 ◼ 点种培养：用接种针沾取斜面少许孢子在无菌的察氏 培养基中央穿刺接种（倒置培养皿穿刺接种），3０ ℃下培养7～10 d，形成巨大菌落培养物。 ◼ 直接制片：于洁净载玻片中央加一滴乳酸石炭酸棉蓝 染色液，打开霉菌平板培养物，用解剖针从菌落的边 缘挑取少量带有孢子的菌丝，放入载玻片的染液中， 细心地把菌丝挑散开，加盖玻片，注意不要产生气泡 ，置于显微镜下观察，菌丝呈兰色，颜色的深度随菌 龄的增加而减弱。 5

方法及操作CULTU观察根霉时，注意观察其菌丝有无横隔、假根、孢子囊柄、孢子囊、囊轴、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子。观察毛霉时，注意观察其菌丝有无横隔、孢子囊柄、囊轴、孢子囊孢子及厚垣孢子。观察曲霉时，注意观察其菌丝有无横隔、足细胞、分生孢子梗、顶囊、小梗（形状、层数及着生情况）、分生孢子。观察青霉时，注意观察其菌丝有无横隔、分生孢子梗、帚状枝（小梗的轮数及对称性）、分生孢子。6

方法及操作 ◼ 观察根霉时，注意观察其菌丝有无横隔、假根、孢子囊 柄、孢子囊、囊轴、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子。 ◼ 观察毛霉时，注意观察其菌丝有无横隔、孢子囊柄、囊 轴、孢子囊孢子及厚垣孢子。 ◼ 观察曲霉时，注意观察其菌丝有无横隔、足细胞、分生 孢子梗、顶囊、小梗（形状、层数及着生情况）、分生 孢子。 ◼ 观察青霉时，注意观察其菌丝有无横隔、分生孢子梗、 帚状枝（小梗的轮数及对称性）、分生孢子。 6

观察形态TR菌落形态毛霉菌落黑根霉菌落

观察形态 ◼ 菌落形态 7 黑根霉菌落

观察形态ITURA菌落形态青霉菌落曲霉（黑曲霉）菌落8

观察形态 ◼ 菌落形态 8 曲霉（黑曲霉）菌落 青霉菌落

观察形态CTRAL形态构造：[由菌丝和菌丝体构成。孢子囊衰轴芽孢子囊托孢囊梗匍匐枝接合孢子囊假根9

观察形态 ◼ 形态构造：由菌丝和菌丝体构成。 9

观察形态1.菌丝：霉菌的菌丝是构成霉菌营养体的基本单位。菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很像一根透明胶管，它的直径一般3～10微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。营养菌丝：伸入培养基吸收营养菌丝培养基气生菌丝：向空中生长繁殖菌丝按形态分繁殖菌丝：产生孢子气生菌丝基内菌丝10

观察形态 1. 菌丝：霉菌的菌丝是构成霉菌营养体的基本单位。菌 丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很像一 根透明胶管，它的直径一般3～10微米，比细菌和放线菌 的细胞约粗几倍到几十倍。 10 菌丝 营养菌丝：伸入培养基吸收营养 气生菌丝：向空中生长 繁殖菌丝：产生孢子 按形态分