福建医科大学：《生物化学与分子生物学》课程教学课件（PPT讲稿）实验二 酶动力学分析（碱性磷酸酶）

生物化学与分子生物学实验碱性磷酸酶动力学分析

生物化学与分子生物学实验 碱性磷酸酶 动力学分析

分光光度法·定义：根据物质对光的吸收特性和吸收强度，对物质进行定性和定量的分析方法

分光光度法 • 定义： 根据物质对光的吸收特性和吸收 强度，对物质进行定性和定量的分析方 法

红紫红批20612O互补色O12品红黄2550266O紫黄绿互补色光M12702550如：黄光和蓝光；绿0红光和青光。2560鼓青绿青0127255256127255255

互补色 互补色光—— 如：黄光和蓝光； 红光和青光

溶液的颜色溶液的颜色实质是它所吸收的色光的互补色。如：日光照射KMnO4，其中绿光被吸收，故溶液呈紫色。CuSO4呈蓝色是由于溶液吸收了黄光。溶液越浓，光选择吸收越多，颜色越深。比较溶液颜色的深浅，实质比较溶液对光的吸收程度

溶液的颜色实质是它所吸收的色光的互补 色。如：日光照射KMnO4，其中绿光被吸收 ，故溶液呈紫色。CuSO4呈蓝色是由于溶液吸 收了黄光。 溶液越浓，光选择吸收越多，颜色越深。 比较溶液颜色的深浅，实质比较溶液对光 的吸收程度。 溶液的颜色

基本原理·Lambert-Beer定律，吸光度与溶液的浓度成正比，与光束通过溶液的距离（即光程）成正比用数学表达式表示为：A=KLC·C：物质的浓度(mg/ml，mol/L），L：光程（cm），K为吸光系数或消光系数

基本原理 • Lambert-Beer定律，吸光度与溶液的浓度成 正比，与光束通过溶液的距离(即光程)成正比 ，用数学表达式表示为： A=KLC • C：物质的浓度(mg/ml, mol/L)，L：光程（ cm），K为吸光系数或消光系数

·当一束平行单色光通过溶液时，一部分被吸收，一部分则透过溶液。·入射光强度为Io，透射光强度为It！·则透光度 T= 兴×100%loIo·吸光度（A）或称光密度(OD)或称消光度（E)三A= -IgTA-KLC

• 当一束平行单色光通过溶液时，一部分被吸收，一部分则 透过溶液。 • 入射光强度为I0，透射光强度为It， • 则透光度 T= • 吸光度(A)或称光密度(OD)或称消光度(E) A= - lgT A=KLC I0 It 100% Io It

影响酶促反应的因素酶促反应动力学：研究酶促反应速率及其影响因素，并进行定量分析影响因素包括：底物浓度酶浓度※研究一种因素的影响PH时，其余各因素均恒定温度激活剂等抑制剂

※ 研究一种因素的影响 时，其余各因素均恒定。 影响酶促反应的因素 ◼ 酶促反应动力学：研究酶促反应速率及其影 响因素，并进行定量分析。 ◼ 影响因素包括： 底物浓度 酶浓度 pH 温度 抑制剂、激活剂等

底物浓度对反应速率影响在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速率的影响呈矩形双曲线关系。0Km底物浓度[S]

底物浓度对反应速率影响 在其他因素不 变的情况下，底物 浓度对反应速率的 影响呈矩形双曲线 关系

EEEmaxEEEEEE-E[S]当底物浓度较低时：一级反应：反应速率与底物浓度成正比

当底物浓度较低时： [S] V Vmax 一级反应：反应速率与底物浓度成正比

max[S]随着底物浓度的增高：混合级反应：反应速率不再成正比例加速

随着底物浓度的增高： [S] V Vmax 混合级反应：反应速率不再成正比例加速