锦州医科大学：《分子医学实验技术》课程教学课件（讲稿）SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳

SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳 分子医学实验教学平台

SDS-PAGE

前言聚丙烯酰胺凝胶电泳即SDS-PolyacrylamideGelElectrophoresis，简称为SDS-PAGE。是以聚丙烯酰胺凝胶作为介质的一种电泳技术，是一种常用的蛋白质鉴定和分离纯化方法。该电泳技术通过消除蛋白质之间的电荷和构象差异，依据分子量的大小将不同蛋自质分子分离开来

聚丙烯酰胺凝胶电泳即SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis，简称为SDS-PAGE。 是以聚丙烯酰胺凝胶作为介质的一种电泳技术， 是一种常用的蛋白质鉴定和分离纯化方法。该 电泳技术通过消除蛋白质之间的电荷和构象差 异，依据分子量的大小将不同蛋白质分子分离 开来。 前言

教学内容CONTENTS01SDS-PAGE分离蛋白质的基本原理和方法及基本操作流程一02垂直板电泳上样及上样体积计算03WesternBlot的基本原理、操作过程及应用04蛋白质提取保存、分离纯化、浓度测定的方法及相应原理

教学内容 CONTENTS 01 SDS-PAGE分离蛋白质的基本原理和方法及基本操作流程 02 03 垂直板电泳上样及上样体积计算 04 Western Blot的基本原理、操作过程及应用 蛋白质提取保存、分离纯化、浓度测定的方法及相应原理

实验目的熟悉电泳的基本原理和技术。掌握SDS-PAGE分离蛋白质的基本原理和方法，了解其应用熟悉WesternBlot的基本原理，了解其应用E悦禅010302

实验目的 熟悉电泳的基本原理和技术。 掌握SDS-PAGE分离蛋白质的基本原理和方法，了解其应用。 熟悉Western Blot的基本原理，了解其应用。 01 02 03

电泳介质实验原理微观宏观TLFOTTLEOT

实验原理——电泳介质 TITLE01 宏观 TITLE01 微观

实验原理凝胶成分H-EIVCHCH2CHACRYLNN'METHYLENE-BISACRYLAMIDE丙烯酰胺(Acr)聚丙烯酰胺凝胶甲叉双丙烯酰胺(Bis)

实验原理——凝胶成分 丙烯酰胺 (Acr) 甲叉双丙 烯酰胺 (Bis) 聚丙烯酰 胺凝胶

实验原理聚合方法原理催化剂：过硫酸铵（AP）化学聚合法加速剂：四甲基乙二胺（TEMED）聚合过程：TEMED催化AP产生自由基，自由基引发单体聚合原理催化剂：核黄素光聚合法光照使核黄素产生自由基从而诱发聚合反应

实验原理——聚合方法 光聚合法 化学聚合法 催化剂：过硫酸铵（AP） 加速剂：四甲基乙二胺（TEMED） 聚合过程： TEMED催化AP产生自由基，自由基引 发单体聚合 原理 催化剂：核黄素 光照使核黄素产生自由基从而诱发聚合反应 原理

实验原理凝胶浓度与交联度凝胶总浓度T%100mL凝胶溶液中含Acr和Bis的总克数T%越大，凝胶孔径越小交联度C%凝胶溶液中Bis占(单体+交联剂)总量的百分比当T%固定时，C%在5%时孔径最小

实验原理——凝胶浓度与交联度 C% T% 100mL凝胶溶液中含Acr和Bis的总克数 T%越大，凝胶孔径越小 凝胶总浓度 凝胶溶液中Bis占(单体+交联剂)总量的百分比 当T%固定时，C%在5%时孔径最小 交联度

实验原理凝胶浓度与交联度大孔径SDS-PAGE的浓缩胶低浓度凝胶等电聚焦电泳DNA分离小孔径SDS-PAGE分离胶高浓度凝胶

高浓度凝胶 SDS-PAGE的浓缩胶 等电聚焦电泳 DNA分离 大孔径 SDS-PAGE分离胶 小孔径 低浓度凝胶 实验原理——凝胶浓度与交联度

实验原理凝胶浓度与交联度通常凝胶按“Bis-Acr"比为1：29配制总胶浓度（%）分子量范围(kDa)205-401515-4018-9010830-15060-2205

通常， 凝胶按“Bis-Acr”比为1：29配制 总胶浓度（%） 分子量范围（kDa） 20 5-40 15 15-40 10 18-90 8 30-150 5 60-220 实验原理——凝胶浓度与交联度