上海交通大学：《在实验中探究生物技术》课程教学资源（实验）酶的“奥妙”——蛋白质的分析检测（SDS－PAGE电泳）

实验5 酶的“奥妙

酶的“奥妙

本次实验项目 5.1 蛋白质的盐析沉淀 5.2 蛋白质的分析检测 SDS一PAGE电泳

5.1 蛋白质的盐析沉淀 5.2 蛋白质的分析检测 ——SDS－PAGE电泳

5.1 蛋白质的盐析沉淀

5.1 蛋白质的盐析沉淀

5.2 蛋白质的分析检测 SDS一PAGE电泳

5.2.1 实验原理 SDS-PAGE凝胶电泳 Mixcture of Mass mactomolocules (kd) Top 200 Porous gel 100 主要依据蛋白质 68 的分子量对其进 Electrophoresis 行分离 4 36 29 17 12 Bottom

SDS-PAGE凝胶电泳 主要依据蛋白质 的分子量对其进 行分离

聚丙烯酰胺凝胶的制备 we m (Cn,-22mn-)em Acrylamide Methylenebisacrylamide S2-(persulfatel 2 SO (sulfate free radicall CONH2 CONH2 -CH2-CH-CH2-CH-CH,-CH- CONH CH2 CONH -CH2-CH-CH,-CH-CH2-CH- CONH2 CONH2

聚丙烯酰胺凝胶的制备

SDS对蛋白质的变性作用 级结构 三级结构 Z 00U 指 000/0 阝-结构 a-螺旋 二级结构 四级结构 SDS A boiling 蛋白质 变性蛋白质成一线形分子并且均 匀带上一层负电荷

SDS对蛋白质的变性作用 蛋白质 变性蛋白质成一线形分子并且均 匀带上一层负电荷

加样电泳 LLLUUULU sisejoydonoaje

加样电泳

制胶 加样电泳 染色分析

制胶 加样电泳 染色分析

5.2.2 实验材料 (一)SDS一PAGE电泳试剂 1、配胶试剂 Acr/Bis (30%) 1# ddH2O 1.5mol/L Tris-HCI (pH 8.8) 10%SDS 0.5mol/L TrisHCI (pH 6.8> 10%Ap 2、电极缓冲液 3、染色液 4、脱色液

（一）SDS－PAGE电泳试剂 1、配胶试剂 Acr/Bis（30%） 1# ddH2O 2# 1.5mol/L Tris·HCl（pH 8.8） 3# 10% SDS 4# 0.5mol/L Tris·HCl（pH 6.8） 5# 10% Ap 6# 2、电极缓冲液 3、染色液 4、脱色液