温州医学院：《医学免疫学》课程教学资源（PPT实验讲稿）第九单元 免疫增殖性疾病的免疫学检验

第九单元 免疫增殖性疾病的免疫学检验 人卫定曲版法

第九单元 免疫增殖性疾病的免疫学检验

概述 令免疫增殖病通常是指以浆细胞、淋巴细胞和巨噬细 胞异常增生为特征的疾病,其表现往往有免疫功能 异常及免疫球蛋白质和量的变化。 令与免疫学检验最为密切的是B淋巴细胞异常增殖或 其他导致免疫球蛋白异常的免疫球蛋白病,免疫球 蛋白病主要表现为高免疫球蛋白血症。 人氏卫士出版 PEOLESM DEAL PUOLRGN成

概 述 ❖ 免疫增殖病通常是指以浆细胞、淋巴细胞和巨噬细 胞异常增生为特征的疾病，其表现往往有免疫功能 异常及免疫球蛋白质和量的变化。 ❖ 与免疫学检验最为密切的是B淋巴细胞异常增殖或 其他导致免疫球蛋白异常的免疫球蛋白病，免疫球 蛋白病主要表现为高免疫球蛋白血症

令当临床上考虑为多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症或其它 浆细胞恶变等免疫球蛋白病时,一般先以血清蛋白区 带电泳、兔疫球蛋白定量检测或尿本-周蛋白定性作 为初筛实验。 令如果发现有异常球蛋白区带,继而进行免疫固定电泳 免疫球蛋白亚型定量等检测做进一步定量分析和兔疫 球蛋白分类鉴定。 人氏卫士出版 PEOLESM DEAL PUOLRGN成

❖ 当临床上考虑为多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症或其它 浆细胞恶变等免疫球蛋白病时，一般先以血清蛋白区 带电泳、免疫球蛋白定量检测或尿本－周蛋白定性作 为初筛实验。 ❖ 如果发现有异常球蛋白区带，继而进行免疫固定电泳、 免疫球蛋白亚型定量等检测做进一步定量分析和免疫 球蛋白分类鉴定

实验 血清免疫固定电泳实验 人卫定曲版法

实验一 血清免疫固定电泳实验

实验目的 令本实验以血清免疫固定电泳实验为例进行实习 通过实习,熟悉血清免疫固定电泳的实验过程及 注意事项;掌握血清免疫固定电泳检测M蛋白的基 本原理与临床意义。 人卫定曲版法

实验目的 ❖ 本实验以血清免疫固定电泳实验为例进行实习 ❖ 通过实习，熟悉血清免疫固定电泳的实验过程及 注意事项；掌握血清免疫固定电泳检测M蛋白的基 本原理与临床意义

实验原理 ◇将患者血清在琼脂糖凝胶介质上经电泳分离后,将固定剂 和各型lg及其轻链抗血清加于凝胶表面的各自泳道上,经孵 育让固定剂和抗血清在各自泳道对应的凝胶內渗透并扩散 若有对应抗原存在,则在适当位置形成抗原抗体复合物并 沉淀下来。电泳凝胶在洗脱液中漂洗,去除未结合蛋白质 仅保留贮存在凝胶内的抗原抗体复合物。经染色后蛋白质 电泳参考道和抗原抗体沉淀区带被 Acide viole色液着色。 根据电泳移动距离分离出单克隆组分。 人卫定曲版法

实验原理 ❖ 将患者血清在琼脂糖凝胶介质上经电泳分离后，将固定剂 和各型Ig及其轻链抗血清加于凝胶表面的各自泳道上，经孵 育让固定剂和抗血清在各自泳道对应的凝胶内渗透并扩散， 若有对应抗原存在，则在适当位置形成抗原抗体复合物并 沉淀下来。电泳凝胶在洗脱液中漂洗，去除未结合蛋白质， 仅保留贮存在凝胶内的抗原抗体复合物。经染色后蛋白质 电泳参考道和抗原抗体沉淀区带被Acide Violet染色液着色。 根据电泳移动距离分离出单克隆组分

试剂与器材 ◆ AcideⅤ iolet染色液:用110%冰醋酸溶解 Acide Violet。 令脱色液:用I蒸馏水溶解 Citric acid destain。 ◆清洗液:8L蒸馏水溶解Tris- Buffered saline。 ☆电泳仪: spife3000全自动电泳仪。 人卫定曲版法

试剂与器材 ❖ Acide Violet染色液：用1L 10%冰醋酸溶解Acide Violet。 ❖ 脱色液：用1L蒸馏水溶解Citric Acid Destain。 ❖ 清洗液：8L蒸馏水溶解Tris-Buffered Saline。 ❖ 电泳仪：spife 3000全自动电泳仪

Spife30全自动电泳仪 人卫定曲版法

Spife 3000全自动电泳仪

操作步骤 ◆样本处理: 用生理盐水将血清标本适当稀释后备用,其中同一份血清 第一泳道样本稀释3倍,第二至第六泳道样本稀释5倍。 人卫定曲版法

操作步骤 ❖样本处理： 用生理盐水将血清标本适当稀释后备用，其中同一份血清 第一泳道样本稀释3倍，第二至第六泳道样本稀释5倍

令区带电泳 上样 胶片准备 电泳 人卫定曲版法

❖区带电泳 上样 胶片准备 电泳